FMNL2通过RhoAROCK信号通路促进大肠癌细胞运动和转移.pptVIP

* * FMNL2：通过RhoA/ROCK信号通路促进大肠癌细胞运动和转移 梁莉，朱曦龄，曾元凤，丁彦青 南方医科大学病理学系 广州510515 转移是导致大肠癌患者死亡的主要原因，转移相关基因的功能学研究是当今肿瘤转移发生、发展研究的重要内容。 研究背景 1 SW620 SW480 SW480/M5 提示FMNL2与大肠癌的转移相关 基因表达谱 SW620 SW480/M5 FMNL2增高 2 FMNL2基因的编码产物是属于Formin蛋白家族中的 DRFs亚类的 成员, 这是一类肌动蛋白细胞骨架的 重要调节因子，下图是它的结构示意图: GBD DID DD CC FH1 FH2 DAD Rho-GTP regulation G-actin recruitiment Actin nucleation Filament assembly Regu- lation 2 近年来研究表明，DRFs家族成员（如:Dia1,DAAM1 等）通过调节细胞骨架的重建在肿瘤细胞的侵袭和迁 移等方面起到了重要的作用 目前有关FMNL2的文献仅有几篇，是个功能未知基因， 我们首次探讨了其在大肠癌转移的作用 1 一、FMNL2在不同转移能力大肠癌细胞株中的表达 SW620 SW480/M5 LoVo LS174T HT29 SW480 n-fold FMNL2 mRNA expression related to SW480 SW620 SW480/M5 LoVo HT29 SW480 二、FMNL2在各阶段大肠癌组织中的表达 A:FMNL2在正常大肠黏膜中的表达; B:FMNL2在未发生转移的大肠癌中的表达; C:FMNL2在发生转移的大肠癌中的表达; D:FMNL2在淋巴结转移癌中的表达 DAB染色，苏木素复染 ×200 表1 FMNL2蛋白在大肠正常黏膜、癌及淋巴结转移癌中的表达 7 (15%) 22 (49%) 7 (16%) 9 (20%) 淋巴结转移灶（45） 3 (4％) 23 (31％) 34 (45％) 15 (20％) 大肠癌（75） 0 0 8 (27％) 22 (73％) 正常黏膜（30） +++ ++ + － FMNL2表达 组别（例数） (73%) (27%) P0.01 P=0.01 (30) (75) (45) － + 1 免疫组化统计结果 3(6%) 16(36％) 20(44％) 6(13％) 转移组(45) P=0.031 0 7(23％) 14(47％) 9(3％) 未转移组(30) 转移情况 2(4%) 19（38%） 19（38%） 10（20%） 高或中分化(50) P005 1(4%) 4（16%) 15（60%) 5（20%) 低分化(25) 分化程度 3(5%) 20（30%） 31（46%) 13（19%） 深层(67) P0.05 0 3（38%） 3（37%） 2（25%） 浅层(8) 浸润程度 P +++ ++ + - 分组 表 2 FMNL2在不同类型大肠癌组织中的表达分布 浸润程度 分化程度 P0.05 P=0.031 转移情况 P0.05 Well or Moderate Poor Profound layer Superficial layer Metastasized Non-metastasized n-fold FMNL2 expression related to corresponding normal tissue P＝0.636 P＝0.407 P＝0.017 2 荧光定量PCR结果 FMNL2的过表达与大肠癌的发生、转移呈正相关 三、FMNL2基因沉默对大肠癌细胞体内外实验的影响 体外生长曲线 1 平板克隆形成实验 2 对FN粘附实验 3 同质粘附实验 4 细胞体外运动实验 5 6 细胞体外侵袭实验 FMNL2基因沉默后，细胞在体外的运动、 侵袭力降低，粘附能力没有明显的改变 7 裸鼠皮下成瘤实验 8 脾注射法体内转移实验 FMNL2基因沉默后，细胞在裸鼠体内的皮下成瘤和转移能力降低