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紫茎泽兰叶第四级提取物治疗鸡球虫病的研究 　　摘要：选择健康、体重相近的25日龄铁脚麻鸡30只随机分为3组，第1组不作处理（空白对照组），第2、3组滴喂球虫孢子，3 d后第2组投喂地克珠利，第3组投喂紫茎泽兰（Eupatorium adenophorum）第四级提取物，7 d后试验结束，分别计算药物抗球虫指数，测定小鸡血液丙氨酸氨基转移酶活性。此外，用质谱、红外光谱、核磁共振等测定试验药物分子结构。结果表明，第3组抗球虫指数为188.67，疗效达到高效。试验药物组的丙氨酸氨基转移酶活性平均值为99.88，低于空白对照组的，除肠道外其他器官未见异常症状，说明试验药物具有一定的毒性，但对鸡的毒副作用较小。分子结构测定表明试验药物为含有苯胺和氯的结构复杂的脂类。 　　关键词：紫茎泽兰（Eupatorium adenophorum）；提取物；治疗；鸡球虫病 　　中图分类号：S859 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）22-5525-03 　　鸡球虫病是鸡常见且危害十分严重的寄生虫病，是一种或多种球虫引起的急性流行性寄生虫病。球虫的抗药变异性强，目前所用的抗球虫药物几乎都已出现抗药虫株[1]，如今即使在用药情况下仍可暴发球虫病或出现亚临床感染情况[2，3]，给养鸡业造成很大损失[4-6]。紫茎泽兰（Eupatorium adenophorum）是外来入侵植物，对动植物均有危害，难以防治[7]，已在中国南方地区广泛蔓延[8，9]，对生态系统造成严重破坏[10]，已被国家环保总局列为外来有害物种[11]。为了开发利用紫茎泽兰，本研究用其叶的第四级提取物进行鸡球虫病的治疗试验，探究紫茎泽兰毒素对鸡球虫的抑制能力，既为治疗鸡球虫病寻找新药物，也为紫茎泽兰的利用探索新途径。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　紫茎泽兰鲜叶采自野生植株；含球虫卵囊鸡粪采自暴发球虫病的养鸡场；试验动物为25日龄铁脚麻鸡。 　　主要试剂：异丙醇、石油醚、乙酸乙酯、乙醇、2.5%重铬酸钾溶液、生理盐水、硅胶（200～300目）、抗球虫药物地克珠利、丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒、肝素。 　　主要仪器：干燥箱、旋转蒸发仪、培养箱、离心机、显微镜、微量移液器、色谱柱管、电子天平、半自动生化分析仪。 　　1.2 方法 　　1.2.1 紫茎泽兰第四级提取物的制备 将紫茎泽兰鲜叶置干燥箱内于65 ℃中烘干，粉碎后于试剂瓶中用异丙醇浸泡5 d，过滤，用旋转蒸发仪浓缩滤液。用硅胶柱层析法对浓缩液进行组分分离，各级洗脱液为：石油醚、石油醚︰乙酸乙酯（分5级：3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3）、乙酸乙酯、乙酸乙酯∶乙醇（分3级：2∶1、1∶1、1∶2）、乙醇。用旋转蒸发仪把第四级组分的洗脱液蒸发后所得即为紫茎泽兰第四级提取物。 　　1.2.2 球虫孢子囊的获取 将球虫病患鸡粪便放入清水中搅成悬液后用棉布过滤，滤液经离心（3 000 r/min，10 min）后弃去上清液，加清水把沉淀物搅溶后再离心，重复上述操作3次，弃去上清液后得到球虫卵囊（含多种球虫的）。将球虫卵囊放入2.5%重铬酸钾溶液中于29 ℃中培养5 d，显微镜下观察， 确认卵囊孵化为孢子囊后将培养液离心， 弃去上清液后加清水洗涤离心3次，弃去上清液， 加入适量生理盐水得球虫孢子囊悬液。用微量移液器吸取2 μL该悬液于载玻片上，显微镜下计数孢子囊数量，重复3次，用3次的平均数算出1 mL悬液中孢子囊的数量。 　　1.2.3 试验分组及处理 25日龄铁脚麻鸡购进后观察2 d，淘汰特小个体，随机分为3组，第1组为空白对照组，第2组为对照药物（地克珠利组），第3组为试验药物组（紫茎泽兰叶第四级提取物组），每组10只，分别称重。给第2、3组试验鸡滴喂球虫孢子，每只的滴喂量为2万～4万个（根据上述计数结果确定悬液滴喂量），空白对照组不作处理。接种球虫3 d后， 取血便于显微镜下检查， 确认各试验组鸡患球虫病后给第2组投喂浓度为0.15 mL/L地克珠利水溶液，剂量按说明书使用，第3组投喂紫茎泽兰第四级提取物，用量为0.5 g/kg拌料使用。试验期间正常管理，投药7 d后将各组鸡分别称重、抽血、屠宰、解剖。 　　1.2.4 抗球虫效果评判 　　1）相对增重率。相对增重率（%）=药物试验组的平均增重/空白对照组的平均增重×100 　　2）存活率。存活率（%）=每组终末存活数/每组初始鸡只数×100 　　3）病变值。先根据病变的严重程度，用Johnson标准进行病变记分[12]，具体记分方法为：肠道壁无肉眼可见病变者记为0分；肠道壁有少量散在的淤血点、肠道壁不增厚，内容物正常者记为1分；肠道壁有较多的淤血点、肠道内容物明显带血、肠道壁增厚、盲肠内容物正常者记为2分；肠道有