普鲁卡因急性毒性测定.docVIP

普鲁卡因急性毒性（LD50）的测定 LD50的方法、步骤及计算过程，观察受试药品一次给予动物后所产生的急性毒性反应和死亡情况。 【原理】药物给药剂量与动物死亡率间呈正态分布，以对数剂量为横坐标、死亡率为纵坐标作图，可得到一对称S型曲线，其两端较平坦，中间较陡，说明两端处剂量稍有变化时死亡率的改变不易表现出来，在50%死亡率处斜率最大，该处剂量稍有变动时，其死亡率变动最明显，即最灵敏，在技术上也最容易测得准确，所以人们常选用LD50值作为反映药物的指标。若将死亡率换算成机率单位，则对数剂量与机率单位呈直线关系，用数学方法可拟合其回归方程式，可精确地计算LD50及引起任何死亡率的剂量及相关数据。 【器材和药品】注射器（1ml）、天平、小鼠笼、苦味酸；盐酸普鲁卡因。 【动物】18～22g健康小鼠50只 正式试验 ，雌雄各半（雌鼠应无孕），实验前禁食12h，不禁水。 【方法】 1.预试验 目的是寻找引起0%和100%动物死亡的剂量范围，以便正式实验时确定各组剂量。一般是取小鼠9～12只，分3～4组，选择组距较大的一系列剂量腹腔注射给药，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%及100%死亡率，至少应找出引起20%～80%死亡率的剂量范围，以保证量-效曲线跨越足够的范围。普鲁卡因小鼠腹腔注射（ip）引起0%和100%动物死亡的剂量范围的参考值为：最小剂量（Dmin）121.3mg/kg，最大剂量（Dmax） 290mg/kg。 2.剂量计算及药液配制 1 剂量计算 根据预试结果找出Dmax及Dmin，设正式实验的剂量组数为n，剂量公比为r，则各组剂量为Dmax·rk-1，k为第几组，一般选用4～5组动物，r为0.6～0.85为宜。 例 已知普鲁卡因Dmin 121.3mg/kg， Dmax 290mg/kg 当n 6时，r 0.84, 各组剂量为： 1. 290 mg/kg 2. 290 mg/kg×0.84 243.6mg/kg 3. 290 mg/kg×0.842 204.6mg/kg 4. 290 mg/kg×0.843 171.9mg/kg 5. 290 mg/kg×0.844 144.4mg/kg 6. 290 mg/kg×0.845 121.3mg/kg 当n 5时，r 0.81，各组剂量为： 1. 290 mg/kg 2. 290 mg/kg×0.81 234.9mg/kg 3. 290 mg/kg×0.812 190.3mg/kg 4. 290 mg/kg×0.812 154.1mg/kg 5. 290 mg/kg×0.812 124.8mg/kg （2）药液配制 ①药源充足时的配药方法 最高浓度药液（母液）的配制 小鼠腹腔注射体积为0.2ml/10g 20ml/kg，每组药液量为4ml左右，为留有余地，各组动物所需药液体积定为6ml。 求出所需母液体积（V）及母液所需药量（M） V 各组动物所需药液体积 / 1-r 6 / 1-0.84 37.5ml M V ′ Dmax/ 20ml/kg 37.5′ 290/kg / 20ml/kg 543.75mg 各剂量组药液按下法稀释： 543.75mg+生理盐水至37.5ml，混匀 → 第一组取6ml ↓ 31.5ml+生理盐水6ml，混匀 → 第二组取6ml ↓ 31.5ml+生理盐水6ml，混匀→ 第三组取6ml ↓ 31.5ml+生理盐水6ml，混匀 → 第四组取6ml ↓ 31.5ml+生量盐水6ml，混匀 → 第五组取6ml ↓ 31.5ml+生理盐水6ml，混匀，为第六组药液 若分为5个组，则 V 各组动物所需药液体积 / 1-r 6 / 1-0.81 31.5ml M V ′ Dmax/ 20ml/kg 31.5′ 290/kg / 20ml/kg 456.75mg ②药源紧张时的配药法 各组所需母液的体积（ml）为： 第一组 6 第二组 6*r 第三组 6*r2 第四组 6*r3 第五组 6*r4 第六组 6*r5 母液总体积 V 6′ 1+ r+ r2+ r3+ r4+ r5 总药量 M 母液总体积′Dmax/（20ml/kg） 计算出V、M后，取药量M，用生理盐水稀释至Vml，用移液管精密吸取各组所需的母液量，加生理盐水稀释至6ml，即为各组试验药液。 3．动物分组：将小鼠雌、雄分开。分别称重，同一重量段（如 18.0-18.9g）小鼠放入一个笼内，标记小鼠。雌、雄小鼠分别按重量顺序分层随机分为6组，使不同性别和体重的小鼠能均匀分配于各组，每组10只。 4．给药：各组动物分别腹腔注射相应浓度的药液0.2ml/10g，立即详细观察，记录动物反应情况、死