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实验二十九 顶空-GC法检查药物中残留有机溶剂 一 目的要求 1．了解并熟悉顶空气相色谱法基本原理及操作技术。 2．了解并熟悉利用顶空气相色谱法检查药品中残留有机溶剂的方法。 3．掌握溶残限量的计算方法 二 基本原理 1. 有机溶剂残留量检查是中国药典规定的常规检查项目，目的是检查限制残留在药物中的有毒、有害有机溶剂。 2. 顶空分析实质上是一种气相萃取方法，这种方法是基于在一定的条件下，某些物质的气相和凝聚相（液相或固相）之间存在着分配平衡，所以测定气相的组成就可知凝聚相的组成。由于取凝聚相上方的气相部分进行分析可以大大减少样品基质对分析的干扰，因此顶空分析是一种理想的样品净化方法。 顶空气相色谱法(Head Space Gas Chromatography HSGC)是顶空分析与GC分析相结合的一种分析方法，它是通过测定样品基质上方的气体成分来确定那些在一定温度下可以汽化的组分在样品中含量的分析方法，由顶空分析的原理可知，HSGC法特别适合高沸点样品中低沸点成分的测定，如药物中有机溶剂残留量的检查。 三 仪器及试剂 SHIMADZU GC－14气相色谱仪, PerkinElmerTurboMatrix40顶空仪，0.1mL吸量管 ，0.5mL吸量管, 5mL吸量管，10mL移液管，100mL容量瓶，25mL容量瓶，顶空瓶，四氢呋喃（ρ:0.889mg/mL，bp:65-67℃，限量0.072%）ρ:1.034mg/mL，bp:101℃，限量0.038%)，吡啶（ρ:0.978mg/mL，bp:115-116℃，限量0.02%）ρ:0.865mg/mL，bp:110.6℃，限量0.089%）ρ:0.792,bp: 64.5℃，限量0.3%乙醇（ρ:0.79,bp: 78.4℃，限量0.5%）；马来酸氯本那敏原料药，左氧氟沙星原料药。 四 操作步骤 1. 马来酸氯本那敏残留溶剂检查 1.1色谱条件 顶空条件：顶空平衡温度为90℃，平衡时间30min；进样时间0.04min，加压时间0.5min，拔针时间0.02min，进样针温度：120℃；传输线温度：140℃。 色谱柱： DM-1（100％二甲基聚硅氧烷）毛细管柱（30m×0.53mm×1.5μm），进样口温度：200℃；检测器温度：250℃；程序升温法测定。 1.2溶液配制 对照溶液的配制：分别精密吸取四氢呋喃0.16mL，1，4－二氧六环0.07mL，吡啶0.04mL置于3个100mL量瓶中，加二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为储备液，分别精密吸取上述储备液5mL分别置于50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得对照液（四氢呋喃：144(g/mL；二氧六环：76(g/mL；吡啶：20(g/mL）。 精密吸取甲苯0.02mL置于100mL容量瓶中加二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照液（178(g/mL）。 1. 3分离度与系统适用性试验 用对照品溶液对仪器进行试验和调整，理论板数按四氢呋喃峰计算不低于5000，分离度、重复性和拖尾因子，应达到中国药典(2010版，二部，附录 )规定的要求。 1.4操作步骤 取本品，精密称定．加二甲基甲酰胺溶解并稀释制成每lmI中约含0.2g的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液与对照品溶液各lml置顶空瓶中，密封。照中国药典(2010版，二部，残留溶剂测定法(附录ⅦP第二法)测定。取对照品溶液顶空进样，记录色谱图。按外标法以峰面积计算。 1.5．计算 2左氧氟沙星残留溶剂检查 2.1色谱条件 顶空条件：顶空平衡温度为80℃，平衡时间30min；进样时间0.04min，加压时间0.5min，拔针时间0.02min，进样针温度：120℃；传输线温度：140℃。 色谱柱： PEG-20M（聚乙二醇20000）毛细管柱（30m×0.53mm×1.5μm），进样口温度：150℃；柱温40℃，检测器温度：180℃；程序升温法测定。 2.2操作步骤 取本品，精密称定．用内标溶液（称取丙酮适量，用0.5mol/L盐酸溶液稀释制成每1ml中含0.01mg的溶液）溶解并稀释制成每1ml中含100mg，精密量取5ml置顶空瓶中，密封，作为供试品溶液；另取甲醇和乙醇，精密称定．用内标溶液定量溶解并稀释制成每1ml中含甲醇和乙醇分别为300μg和500μg的溶液，精密量取5ml置顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。取供试品溶液与对照品溶液分别按照中国药典(2010版，二部，残留溶剂测定法(附录ⅦP第二法)进行测定，记录色谱图。内标峰、甲醇峰与乙醇峰之间的分离度均应符合要求。按内标法以峰面积比值计算，供试品溶液中甲醇和乙醇与内标峰面积比值均不得大于对照品溶液的峰面积比值。 五 注意事项 1. 顶空条件的选择： （1）顶空平衡