实验六短串联重复序列STR的多态性分析.ppt

医学遗传学实验 实验原理 微卫星DNA属于短串联重复（Short Tandem Repeat，STR）序列，其重复序列的拷贝次数在个体间呈现高度变异性（具有多态性和高频率在遗传分析（基因定位）、个体识别（DNA指纹分析）和遗传病的连锁诊断中均得到了广泛的应用，成为目前最有价值的遗传性标记。 对STR多态性的检测，通常采用PCR扩增结合变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增片段的长度多态性（amplified fragment length polymorphism，Amp-FLP）的方法。 实验步骤 1.凝胶槽制作 2.配制适当浓度的凝胶 3.灌胶及凝胶聚合 4.电泳、PCR产物预变性 5.上样及电泳 6.聚丙烯酰胺凝胶中DNA片段的检测 7.基因型确定、分析 注意事项 1.实验中使用的丙烯酰胺是强烈的神经毒素，可经皮肤吸收，且其作用具有累积性；称取粉末状丙烯酰胺及亚甲双丙烯酰胺时必须戴手套和面具。取用含上述化学药品的溶液也要戴手套。 2.EB是一种DNA诱变剂，也是极强的致癌物，使用时要特别小心，操作必须戴手套。防止皮肤接触。如有EB溶液溅到外面，应立即撒上漂白粉促使其分解。 3.紫外线对人的眼睛有很强的刺激作用，操作时要戴眼镜或有机玻璃防护镜。手、脸等体表部位也应尽量避免紫外线过多照射。 4.拔出梳子后，应立即用水将形成的点样孔冲洗干净，以免析出的尿素沉入点样孔内或未聚合的丙烯酰胺进入样品孔重新聚合，造成样品孔不规则。确保点样时，样品能顺利集中地沉到样品孔底部。 5.变性凝胶电泳点样前，先用2～5μl上样缓冲液（不含DNA或反应物）加入点样孔内，500V恒压电泳，直到染料前沿进入凝胶几厘米，此法可在分离电泳时保持凝胶温度，并检查点样孔是否有渗漏。 实验结果 记录并分析本实验室的实验结果，确定每个个体在该位点的基因型 * * 实验六 短串联重复序列 STR 的多态性分析 *