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柑橘全爪螨代谢抗性相关基因表达差异分析 　　摘 要： 【目的】为了明确谷胱甘肽S-转移酶（GST）基因、羧酸酯酶（CarE）基因，过氧化氢酶（CAT）基因在柑橘全爪螨Panonychus citri抗性中的作用，【方法】在室内用噻螨酮对柑橘全爪螨进行抗性选育，进一步构建抗/敏品系数字基因表达谱，采用RPKM法对柑橘全爪螨敏感品系和噻螨酮抗性品系3种代谢抗性相关基因进行表达差异分析。【结果】经过20代抗性选育，获得了柑橘全爪螨噻螨酮抗性品系，与敏感品系比较，柑橘全爪螨对噻螨酮的抗性倍数达到3 532.12倍。基因差异性分析发现，抗性品系中有11条GST基因、17条CarE基因和6条 CAT基因表达上调；14条GST基因、24条CarE基因和3条 CAT基因表达下调。上调倍数最高的GST基因、CarE基因和CAT基因分别为Unigene31530 [log2 ratio（RS/SS）=1.05]、Unigene23121 [log2 ratio（RS/SS）=2.05]和Unigene31477 [log2 ratio（RS/SS）=10.04]。进一步对Unigene31477进行荧光定量PCR分析发现，抗性和敏感品系基因表达水平没有显著差异。【结论】根据柑橘全爪螨抗/敏性品系基因表达差异推断，GST、CarE和CAT基因可能与柑橘全爪螨对噻螨酮产生的抗性没有密切关系。 　　关键词： 柑橘全爪螨； 噻螨酮； 抗性品系； 敏感品系； 代谢酶； 基因表达差异 　　中图分类号：S666 文献标志码：A 文章编号：1009-9980？穴2013？雪01-0022-06 　　柑橘全爪螨Panonychus citri （McGregor）又名柑橘红蜘蛛，属蜘蛛纲蜱螨目叶螨科，是一种世界广泛分布的重要害螨。柑橘全爪螨主要吸食柑橘叶片、嫩梢、花蕾和果实汁液，严重时引起落叶、落花、落果，造成减产。化学防治仍是控制柑橘全爪螨最有效的措施，但由于其个体小、世代多、繁殖力强，对药剂极易产生抗性。目前，柑橘全爪螨已对大多数登记的有机磷、菊酯类杀螨剂产生了抗性[1-4]，专用杀螨剂抗性也极其突出[5-6]。噻螨酮属噻唑烷酮类低毒选择性专用杀螨剂，对柑橘全爪螨卵、幼螨、若螨活性极强，是低温下防治柑橘全爪螨的理想产品，在许多柑橘主产国广泛应用[7-8]。由于施用不当，柑橘全爪螨对噻螨酮已产生严重的抗性[9]，因而有必要建立其科学的抗性治理策略。弄清抗性机理是进行抗性治理的基础。 　　水解酶和保护酶活性增强是昆虫（螨类）对杀虫（螨）剂产生抗性的重要机制[10-11]，而基因的上调是3种代谢酶活性增强最直接的原因，因此，弄清代谢抗性相关基因表达差异是深入研究昆虫（螨类）抗性分子机理的重要途径。鉴于此，笔者通过室内选育，获得了柑橘全爪螨噻螨酮抗性品系，进一步探讨了抗性和敏感品系之间谷胱甘肽S-转移酶（GST）基因、羧酸酯酶（CarE）基因，过氧化氢酶（CAT）基因的表达差异，旨在弄清柑柑橘全爪螨抗性与3种代谢抗性相关基因表达差异的关系，从而明确柑橘全爪螨抗性产生可能的分子机理，为抗性治理提供理论依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　供试虫源：柑橘全爪螨于2005年采自中国农业科学院柑桔研究所多年未施用药剂的柠檬上，后经室内不接触药剂连续饲养至今，视为相对敏感品系。柑橘全爪螨饲养温度为（25±1） ℃、相对湿度为70% ～80%，光周期L∶D =14 h∶10 h。 　　供试药剂：50 g·L-1噻螨酮（hexythiazox）乳油，日本曹达株式会社生产。 　　1.2 柑橘全爪螨的生物测定 　　采用联合国粮农组织推荐的玻片浸渍法[12]。在预备试验的基础上，在柑橘全爪螨雌成螨死亡率20%～90%内按等比级数将供试药剂分别配成5～7个浓度，现配现用。处理时将双面胶带剪成3 cm长贴在载玻片的一端，用细毛笔挑起健康雌成螨，背部贴在胶带上，每块载玻片60头，每处理重复5次，共300头。将载玻片分别浸入药液，轻轻摇动5 s后取出，用吸水纸吸净螨体多余的药液，在室温下晾干，15 min后放入光照培养箱（温度（25±1） ℃，相对湿度为70%～80%，光周期L∶D =14∶10），24 h后在双筒解剖镜下分别观察死、活螨数，以清水处理为对照。 　　1.3 柑橘全爪螨噻螨酮抗性品系选育 　　柑橘全爪螨噻螨酮抗性品系从敏感品系选育而来。测定敏感品系（F0）对噻螨酮的敏感基线，然后以杀死品系70%～90%的噻螨酮浓度处理成螨，记录存活数量，存活个体继续饲养和药剂汰选，选择压力相近，每隔2代测定1次LC50（方法同1.2），观察抗性增长速度。 　　1.4 柑橘全爪螨代谢抗性相关基因差异性分析 　　谷胱甘肽S-转移酶（GST）、羧酸酯酶（