粘质沙雷氏菌α—乙酰乳酸脱羧酶基因的体外表达.docVIP

粘质沙雷氏菌α—乙酰乳酸脱羧酶基因的体外表达 　　摘要：根据GenBank中α-乙酰乳酸脱羧酶的基因序列（slaA）设计引物，以粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）HU1基因组DNA为模板通过PCR扩增得到了目标基因，全长为780 bp。将该基因分别连接到大肠杆菌表达载体pET30a和毕赤酵母表达载体pPICZαA上，构建表达质粒pET30a-slaA和pPICZαA-slaA，并在对应的宿主中进行了表达。结果表明，大肠杆菌和毕赤酵母的表达产物的最适温度和pH均分别为40 ℃和7，两者在不同pH下的稳定性也相似，只不过毕赤酵母的表达产物的热稳定性要略强于大肠杆菌的表达产物。 　　关键词：粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）；α-乙酰乳酸脱羧酶；体外表达 　　中图分类号：Q786 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）10-2431-04 　　在啤酒工业中，双乙酰含量是衡量啤酒成熟与否的重要指标，该物质主要由合成缬氨酸的中间产物α-乙酰乳酸在酵母细胞外经非酶氧化脱羧而产生。由于过多的双乙酰会带来令人不愉快的馊饭味，工程技术人员会使用相关的手段和工艺降低啤酒中的双乙酰浓度到一定范围内[1]。α-乙酰乳酸脱羧酶能够降低啤酒发酵过程中产生的双乙酰，缩短熟化期，改善啤酒口味，加速啤酒的成熟。但是啤酒酵母菌自身不能产生α-乙