益生素-绿禽康对免疫功能的影响.docVIP

英文摘要 图2请用原图，要修改格式 投什么杂志？按其格式 材料与方法的修改 结果分析的描述要修改,必须有数据描述. 讨论不足. 讨论出提高机体免疫应答水平的量,对疾病防治功能的影响 益生素-绿禽康对鸡免疫功能的影响 缪中纬1 黄素芳2 陈晖 1刘波2* 林峰强1 胡奇林1 （福建省农科院畜牧兽医研究所，福州350013； 福建省农科院生物技术研究所，福州350003） 摘 要： 选用1日龄广西黄鸡200只，随机分为4个组，分别饲喂添加绿禽康1‰、0.1‰ 、0.01‰的日粮和无绿禽康日粮对照组。在相同的饲管条件下，进行细胞免疫和血凝抑制实验。结果表明：（1）细胞免疫以1‰添加组为最高，当雏鸡饲喂益生素后7天，其外周血液T细胞增殖反应升高，但统计学差异不显著(PO 05)；饲喂益生素21-28天后，外周血液T细胞增殖反应显著升高，统计学差差异显著（P0.05）。（2）血凝抑制饲喂1‰益生素组血液中血凝抑制抗体效价高于其它各组，在接种后第28d抗体水平达到峰值，随后在接种第35d后抗体水平开始下降，至42天后抗体消失。 自20世纪50年代抗生素被用作添加剂使用以来，其给人类带来的负面影响也逐渐突出，长期使用抗生素会产生相应病菌的耐药性，引起动物免疫机能下降，同时也会导致药物残留，造成环境污染。益生素(Probiotics)， 称益生菌，活菌制剂或微生态制剂。益生素作为一种绿色饲料添加剂已广泛应用于畜牧生产中。由于其具有维持肠道茵群平衡、调节机体免疫、改善机体代谢、净化肠道环境等多方面的作用，且在使用过程中无毒副作用、无药物残留、不产生耐药性，因此已成为抗生素的理想替代品。本实验通过对雏鸡饲喂益生素后，揭示益生素对雏鸡外周血液免疫功能影响的变化规律及其机理，为益生素的进一步应用提供可靠的科学依据。 材料与方法 1.1实验材料 实验动物 1日龄健康广西黄鸡雏鸡200只，购于永安融燕禽业有限公司。 益生素来源：益生素-绿禽康，来源于福建省农科院生物技术研究中心课题组从土壤中筛选出一株对动物肠道病原菌有较强抑制能力的芽孢杆菌,经过中国科学院微生物研究所鉴定为短短芽孢杆菌Bacillus brevis YSSJK-2，经发酵、喷雾干燥，制成每含活菌量为109 cfu/g的益生素产品。 鸡新城疫病毒毒株和血清 鸡新城疫病毒强毒(F48E9)由本所动物病毒室保存；鸡新城疫病毒HI(+)抗体购买自中国农科院哈尔滨兽医研究所，批号：99-01. 实验试剂：主要试剂RMPI 1640培养基，GIBCO BRL公司产品；ConA，Sigma公司产品；MTT，Biomol公司产品；淋巴细胞分离液，上海试剂二厂产品；ELX 800UV型酶标仪（BIO-TEK INSTRUMENT CORPORATION）；96孔细胞培养板，Coster公司产品。 1.2试验方法 鸡新城疫疫苗及免疫时间和途径 鸡新城疫灭活疫苗购于中国农科院哈尔滨兽医研究所（批准文号 兽药生字（2005）080012008）。2周龄雏鸡颈部皮下注射每羽0.2ml，同时以Ⅱ系弱毒疫苗滴鼻。鸡新城疫病毒强毒增殖和血凝试验 用SPF鸡胚增殖，增殖方法及血凝试验参照动物病毒学[1] .实验设计及动物处理：将200只鸡随机分成4组，每组50只。将益生素产品按1‰（大剂量组）、0.1‰ （中剂量组）、0.01‰ （小剂量组）添加于饲料中（每克饲料含菌量为106、105、103 cfu），在全阶段饲料中添加。以基础饲料为空白对照组。 淋巴细胞增殖检测方法 于一免后第0、1、3、4周采样，每次5只。采集无菌抗凝血2ml，缓慢叠加在等量淋巴细胞分离液上，3000r/min 离心10分钟，取中间淋巴细胞层，用4 ml RMPI-1640不完全培养基洗涤2次，离心后沉淀用RMPI-1640完全培养基调节到细胞数5X106个/ml,96孔细胞培养板每孔加淋巴细胞50ul，10ug/lConA,40℃培养45h，每孔10ul 5mg/ml MTT,继续培养3h，2000 r/min 离心20分钟。缓慢倾去上清液，每孔加150ul二甲基亚砜，37℃反应30min，测定OD570nm，计算淋巴细胞刺激指数，公式如下： 试验组OD570ｎｍ-空白OD57０ｎｍ 淋巴细胞刺激指数＝ ———————————————————— 对照组OD570ｎｍ-空白OD570ｎｍ 血凝抑制实验方法 于一免后第0、1、3、4、5、6、7周采样，每次5只。在96孔V型反应板上的第1孔加入50μL 8个单位抗原，第2一11孔加入50μL4个单位抗原，第12孔加入50μL生理盐水。吸取50μL待检血清于第1孔内，充分混均后吸50μL于第2孔，依次倍比稀释至第10孔，弃去50μL:第11孔为