“ ” 黄牛klf4基因第二外显子的SNP检测 指导老师:郝睿杰 学生姓名:王香香 专 业:生物制药 班 级:2012级生物制药班 研究内容 1、研究背景及目的意义 2、研究内容和目标 3、实验流程 4、前期工作 5、实施方案和进度 6、后续工作 1、研究背景及目的意义 2、研究内容和目标 Krüppel样因子4 Krüppel-like factor4/KLF4 是一种含锌指修饰结构的蛋白,在某些部位的上皮组织中高表达,如肠道、皮肤等。 为了研究黄牛klf4基因第二外显子的多态性与生长发育性状的关系,为黄牛经济性状遗传改良提供参考依据。 3、实验流程 采集血样 提取基因组DNA 设计扫描引物 PCR扩增 送公司测序 分析突变位点 设计酶切引物 PCR扩增 PFLP分型及多态性检测 DNA star分析突变位点 PFLP基因型与经济性状关联 4、前期工作 实验开始前期,主要在实验室了解、学习实验所需相关操作,如制胶、电泳、PCR等 所用时间一到两个星期 5、实施方案和进度 步骤一: 参照NCBI(National Center for Biotechnology Information)数据库中公布的klf4基因序列以及第二外显子序列 5、实施方案和进度 5、实施方案和进度 Klf4基因第二外显子所在基因位点为 569——685 bp处 5、实施方案和进度 我将基因200---900 bp处复制下来,利用Primer5.0软件自行设技klf4基因的第三外显子序列的PCR扩增引物 时间5天. 5、实施方案和进度 引物设计结果: 5、实施方案和进度 外显子在369-485 bp处 5. 实施方案与进度 第二外显子引物设计: 上游:5‘ GCTCCTCTTCGTTGGCTTTG 3’ 下游:5‘ ACTCCTGCCCGTCGTTGA 3’ 上游引物起始位点177---195 bp 下游起始位点564---580 bp 4月4号晚上送公司测序,预计5天时间 5、实施方案与进度 BLAST比对结果: 6、后续工作 探索引物合适温度(2天) PCR扩增目的基因 公司测序 分析突变位点 设计酶切引物并送公司合成 PCR 分析关联 谢 谢! “ ”
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