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微生物学考研资料1(沈萍版同步） 一、纯培养和显微技术 无菌技术 ? 用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物； ? 在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染，其自身也不污染环境； 稀释倒平板法：操作较麻烦，对好氧菌、热敏感菌效果不好！ 涂布平板法：使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！ 选择培养分离： 1、抑制大多数其它微生物的生长； 2、使待分离的微生物生长更快；使待分离的微生物在群落中的数量上升，方便用稀释法对其进行纯化。 3、使待分离的微生物生长“突出”；直接挑取待分离的微生物的菌落获得纯培养。 二、微生物类群与形态 古生菌在进化谱系上与真细菌及真核生物相互并列，且与后者关系更近，而其细胞构造却与真细菌较为接近，同属于原核生物。 球菌细胞个体呈球形或椭圆形，不同种的球菌在细胞分裂时会形成不同的空间排列方式，常被作为分类依据。 　　杆状细菌的排列方式常因生长阶段和培养条件而发生变化，一般不作为分类依据。 　　弧菌：菌体只有一个弯曲，其程度不足一圈，形似“C”字或逗号，鞭毛偏端生。 　　螺旋菌：菌体回转如螺旋，螺旋数目和螺距大小因种而异。鞭毛二端生。细胞壁坚韧，菌体较硬。 　　螺旋体菌：菌体柔软，用于运动的类似鞭毛的轴丝位于细胞外鞘内。 　　柄杆菌：细胞上有柄（stalk）、菌丝（hyphae）、附器（appendages）等细胞质伸出物，细胞呈杆状或梭状，并有特征性的细柄。一般生活在淡水中固形物的表面，其异常形态使得菌体的表面积与体积之比增加，能有效地吸收有限的营养物； 　　德国科学家H. N. Schulz等1999年在纳米比亚海岸的海底沉积物中发现的一种硫磺细菌（sulfur bacterium），其大小可达0.75 mm，Thiomargarita namibiensis，“纳米比亚硫磺珍珠”。其体积比E . fishelsoni还大100倍。该菌细胞内约98％的空间都被一个胞液内富含硝酸盐的液泡所占据，而厚度在0.5-2.0 mm、充满硫粒的细胞质层则环绕在液泡的周围。该细胞质层非常薄，其厚度类同于大多数细菌，足以保证适当的扩散速率。液泡中的硝酸盐则被用作硫氧化的电子受体，以产生能量。 　　 一种真核微生物Nanochlorumeukaryotum，直径仅有1 ～ 2 mm，但它却是真正的真核生物，拥有一个核，一个叶绿体和一个线粒体。 证实（研究）细胞壁存在的方法： （1）细菌超薄切片的电镜直接观察； （2）适当的质、壁染色，可以在光学显微镜下看到细胞壁； （3）机械法破裂细胞后，分离得到纯的细胞壁； （4）制备原生质体，观察细胞形态的变化； 脂多糖的主要功能： 1）LPS结构的多变，决定了革兰氏阴性细菌细胞表面抗原决定簇的多样性； 　　根据LPS抗原性的测定，沙门氏菌属(Salmonella)的抗原型多达2107种。这种O-特异侧链种类的变化，一方面可使细菌躲避宿主免疫系统攻击，保持感染成功。另一方面，也使我们可以用灵敏的血清学方法对病原菌进行鉴定，在传染病的诊断中有其重要意义。 2）LPS负电荷较强，与磷壁酸相似，也有吸附Mg2+、Ca2+等阳离子以提高其在细胞表面浓度的作用，对细胞膜结构起稳定作用。 3）类脂A是革兰氏阴性细菌致病物质——内毒素的物质基础； 4）具有控制某些物质进出细胞的部分选择性屏障功能； 5）许多噬菌体在细胞表面的吸附受体； 　　周质空间是进出细胞的物质的重要中转站和反应场所。在周质空间中，存在着多种周质蛋白（periplasmic proteins），包括水解酶类、合成酶类、结合蛋白和受体蛋白 特殊细胞壁的细菌： 　　某些分枝杆菌和诺卡氏菌的细胞壁主要由一类被称为霉菌酸（Mycolic acid）的枝链羟基脂质组成，后者被认为与这些细菌感染能力有关。由磷脂分子形成的双分子膜中加入甾醇类物质可以提高膜的稳定性：真核生物细胞膜中一般含有胆固醇等甾醇，含量为5%-25%。 原核生物与真核生物的最大区别就是其细胞膜中一般不含胆固醇，而是含有hopanoid（藿烷类化合物）。 　　单由磷脂分子形成的膜是不稳定的，但如果在其中加入甾醇类物质就可以提高膜的稳定性（已有实验室证据），而真核生物细胞膜中就含有胆固醇，其含量在5%-25%。而原核生物与真核生物的最大区别就是其细胞膜中一般不含胆固醇等甾醇，而是含有hopanoid类甾醇，其作用被认为也是稳定细胞膜的结构。而这种含有hopanoid类甾醇被认为与地球上化石燃料的形成有很大关联。 　　化石燃料之所以形成，是由于有机物沉积到底下深处后被微生物所作用而氧化成二氧化碳，然后在高温和厌氧的条件下，形成石油和煤炭。据认为，地下沉积物中碳的总量为1016吨。现在已有越来越多的证据表明，这些沉积到地下形成化