短小芽孢杆菌菌液浓度预试.docVIP

关于抗生素检定菌液预试操作学习 1、目的： 学习短小芽孢杆菌浓菌液预试操作程序 2、范围： 卫生学检查用菌种 3、责任： 生测组检验员 4、内容： A、仪器用具与试药 （1） 160～170℃干热灭菌2h用具：陶瓦盖 4个 ；试管 30×200mm 3支 ；镊子 23mm 1把；50ml量筒3个； 25ml量筒 2个 ；250ml锥形瓶3个；钢管 16个 ；1ml吸管 5根 ；大口5ml吸管 4支 ；10ml吸管 1根 ；5ml吸管 1根 ；碟子 4个。 （2）115℃高压湿热灭菌 30分钟：抗生素Ⅰ号培养基（取本品，加入1000ml纯化水，加热煮沸溶解，过滤分装，灭菌）；工服 ； pH7.8缓冲液（取磷酸二氢钾0.41g、磷酸氢二钾7.32g、加水1000ml使溶解）；纯化水 （3）其他：烂烧杯3个（盛放有菌试管）；一次性塑胶手套；电炉；5ml胖肚移液管4根；2个50ml容量瓶；1个100ml容量瓶；滴管；烧杯；滤纸片。 B.准备 2010年7月15日短小芽孢杆菌浓菌液座机电话号码（菌液浓度预试 ），由游标卡尺测抑菌圈大小 取0.2ml原液→40ml培养基 0.5% 高17.56mm 低16.16mm ② 取1.0ml原液+9.0ml灭菌水→0.2ml→ 20ml培养基 0.1% 高17.24mm 低16.52mm 取②中原液和水混合之后的1.0ml+9.0ml水，混合之后，取0.2ml至40ml培养基中 0.05% 高19.46mm 17.66mm ④ 将取②中原液和水混合之后的1.0ml+9.0ml水，混合之后，取0.1ml至40ml培养基中 C 预试浓度操作步骤 1、电炉水浴加热把已配置好的抗生素Ⅰ号培养基溶化（约300ml）耗时30′-60′，一定要全溶，否则影响铺底层与菌层。 2、把标准品从冰箱取出放置在干燥器中晾至恒温（约30′） 3、0.1%新洁尔灭溶液或2%甲酚皂溶液擦拭桌面及拖地板，紫外线杀菌30分钟。万分之一天平插上电源，打开开关，按“F”键使“g”转化“mg”使其稳定。 4、标准品放置30分钟后，用稳定后的万分之一天平用减重法称取对照品25ml容量瓶×1000÷638 39.2mg。如称多了也可倒入容量瓶。但倒完之后复称一下纸重，以此数据才是所称重量，记录下来。 5、用无菌水荡洗好的滴管把容量瓶的颈部周围冲洗干净，观察对照品是否溶解，是否有玻屑。再用无菌水定容至刻度，摇匀。 6、配好对照品溶液放到冰箱保存。 7、培养基完全溶后放入水浴锅（60～65℃）放置15′，即可使温度达到水浴温度（60～65℃），达到水浴温度就可以倒底层，倒时靠着平皿边缘（20ml），不引起气泡。 8、下午把标准品溶液与菌悬液从冰箱取出放置室温。 9、准备二个50ml容量瓶和一个100ml容量瓶、无菌水、滴管、烧杯，滤纸片。 10、每个陶瓦盖上标明1、2、3、4（代表浓度级别）。 11、30×200试管也要标明①、②、③、④、⑤、⑥、、、代表所用试管支数，更能识清，以免弄混。 12、在250ml锥形瓶倒入40ml抗生素Ⅰ号培养基。 13、用1ml灭菌吸管混匀原菌液，吹打。从原菌液中取出0.2ml原液至倒有40ml抗生素Ⅰ号培养基的250ml锥形瓶中，用灭菌带棉花的5ml大口吸管吹匀，再用嘴吸取5ml混合菌液倒1号陶瓦碟内，在中间放下，向周围快速摊平。取原液0.2ml→40ml培养基 0.5% 对高16.10mm 对低14.94mm 14、从原菌液中取1.0ml菌液到①号试管+9ml灭菌水，拿10ml吸管吹打均匀，再从中取0.2ml混合菌液到②号试管中，用量筒加20ml培养基到②号试管，又取5ml大口吸管吹打菌液，混匀取5ml到2号陶瓦盖碟内铺平。 原液+9.0ml无菌水→取0.2ml至20ml培养基 0.1% 对高18.24mm 对低16.68m 15、从①号试管1.0ml菌液+9ml灭菌水中取0.2ml菌液到③号试管，并加40ml培养基，用5ml大口吸管用嘴吹打均匀，再吸5ml到3号陶瓦盖碟内。 1.0ml原液+9.0ml无菌水→取0.2ml加至40ml培养基 0.05% 对高17.26mm 对低18.64mm 16、从①号试管1.0ml菌液+9ml无菌水中取0.1ml菌液到④号试管中，接着用量筒倒入40ml培养基，5ml大口吸管吹打均匀后取5ml到4号陶瓦盖碟内，铺均匀，每一平皿铺完菌层立即盖上陶瓦盖。铺完菌层放置20分钟。 1.0ml原液+9.0ml无菌水→取0.1ml加至40ml培养基 0.025% 对高20.30mm 对低18.32mm 17、利用20分钟配好高、低浓度标准品溶液。 18、吸取放冷至室温的标准品溶液5ml（胖肚移液管先荡洗三次）到50ml容量瓶，用pH7