71无菌检查法精读.doc

＜71＞无菌检查（USP29-NF24） ◆这个章节的大部分内容都和欧洲药典或日本药典相应检测部分保持一致。有一些不一致的地方已用特殊标记（◆◆）注明。◆ 下述步骤被用于检查药典中规定要求无菌的是否满足其专论中相应的无菌要求。供试品的性状允许时，可以采用供试品的无菌检查中的薄膜过滤法来检测。如果薄膜过滤方法不能使用，则采用供试品的无菌检查中的直接接种法进行检测。所有的器具，除了标明的无菌器皿外，都采用直接接种法进行检测。重新检测的规定条款见结果的观测和分析。 因为无菌检测是一项非常严格的操作过程（必须保证无菌操作才能得到一个准确的检测结果），所以对操作人员进行相关的培训和鉴定是非常重要的。无菌检查即在无菌状态下实行。为了达到这个状态，检测的环境必须适合无菌操作。要防止检验过程中暴露的微生物受污染。要对无菌检验的操作环境进行适当地取样检测和合适的控制来监控。 不仅仅通过这些药典中的步骤就能确保一批产品无菌或已经灭菌。确认在无菌状态下操作或按无菌操作步骤操作则是首先需要的。 当用药典中合适的药典方法检测产品中出现了微生物污染，其结果宣判该无菌检测所需方法无效，甚至是更换了操作步骤得到了不同的结果。◆额外的无菌检测信息，参见＜1211＞灭菌和确保无菌概略。◆ 培养基 按以下处方制备培养基，或使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基，其能满足需气菌，厌气菌，霉菌的增殖培养。培养基采用有效的程序灭菌。 下面培养基适合用于无菌检查。硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌气菌的培养。还用于需气菌的培养。大豆粉-酪蛋白消化物培养基适合霉菌和需气菌的培养。 硫乙醇酸盐流体培养基 L-光胺酸 2.5g 氯化钠 5.5g/5.0g 葡萄糖（C6H12O6.H2O） 0.75g 琼脂，颗粒状（含水量不低于15％） 5.0g 酵母浸出物（可溶于水） 15.0g 酪蛋白胰酶消化物 0.5g 巯基乙酸钠或巯基乙酸酯 0.3ml 刃天青钠溶液（1：1000），现配 1.0ml 纯水 1000ml 取L-光胺酸，氯化钠，葡萄糖，酵母浸出物和酪蛋白胰酶消化物混合，加热直到培养基被活化。加入巯基乙酸钠或巯基乙酸酯，如有必要，加1N氢氧化钠，调节PH值使灭菌后为7.1± 0.2。如需过滤，加热培养基不需要煮沸，热时滤过滤纸。加入刃天青钠溶液，混合，马上分装至合适容器中，这样在培养期间最多培养上层基颜色发生变化。配制后采用有效的程序灭菌，培养基放于无菌密闭容器中，2°～25°储存，如果上层超过三分之一的培养基变粉红色 ，培养基需水浴或蒸汽加热直到粉红色消失，迅速冷却，注意防止没有灭菌的空气传入容器中。 硫乙醇酸盐流体培养基置32.5°±2.5°培养。 ◆选择性硫乙醇酸盐培养基 配制与硫乙醇酸盐流体培养基相同组分的培养基，但不加琼脂和刃天青钠溶液，灭菌同上，冷却。灭菌后PH7.1± 0.2。在厌氧条件下培养。 选择性硫乙醇酸盐培养基置32.5°±2.5°培养。◆ 大豆粉-酪蛋白消化物培养基 酪蛋白胰酶消化物 17.0g 大豆粉木瓜蛋白酶消化物 3.0g 氯化钠 5.0g 磷酸氢二钾 2.5g 葡萄糖（C6H12O6.H2O） 2.5/2.3g 纯水 1000ml 在纯水中溶解固体，微温加热活化培养基。培养基冷至室温，加1N氢氧化钠调PH，调节PH值使灭菌后为7.3± 0.2。滤清，然后分装入合适的容器，，除非需要马上使用，放于无菌密闭容器中，2°～25°储存。 ◆青霉素和头孢菌素 在这无菌检测培养基被用于供试品的无菌检查中直接接种法，修改硫乙醇酸盐流体培养基和大豆粉-酪蛋白消化物培养基的配制如下。无菌状态下在每个培养基容器中接种足够数量的β-内酰胺酶以抑制供试品中大量抗生素的活性，首先通过检验产品中含青霉素或头孢菌素的抑菌活力以测定所需要的抑制抗生素活性的β-内酰胺酶数量。[笔记－充足的β-内酰胺酶培养基也可用于薄膜过滤测试。] 在一个与无菌检测完全隔离的区域，确定合适数量的β-内酰胺酶合并接种至培养基中，选择下面验证试验中任一种方法，用不到100cfu的金黄色葡萄球菌（参见表格1）做为挑战。必须可清楚观察到被接种的培养基中有典型的微生物生长，用以确定β-内酰胺酶的含量是合适的。◆ 表格1. 增殖检测和验证试验中适合使用的微生物菌株 好氧菌 金黄色葡萄菌 ◆1 ◆ ATCC6538, CIP4.83,NCTC10788,NCIMB9518 大肠菌群 ATCC6633，CIP52.62, NCIMB8054 铜绿假单胞菌 ◆2 ◆ ATCC9027, NCTC10788, CIP82.118