高中生物选修三动物细胞融合和单克隆抗体详细分析.pptVIP

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体 材料：效应B细胞在体内只能由B淋巴细胞增殖、分化而来,不再进行分裂,在体外培养的条件下，也很难分裂。 5. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （ ） ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞　 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A.②④ B.①③⑤　　 C.①②③④ 　 D.②③ 单克隆抗体的制备 * * (1) (1) (2) (3) (4) (5) 植物体细胞杂交过程 A植物细胞 B植物细胞 原生质体A 原生质体B 融合体 杂种细胞 愈伤组织 杂种小植株 (6) 杂种植株 温故知新: 回忆已学知识，你是否已经见到过动物细胞融合的实例？ 人-鼠(想像图) 鼠细胞 人细胞 人工诱导 一、动物细胞融合 杂交细胞 动物细胞融合（技术）：是指（在一定的条件下）两个或多个细胞融合形成一个细胞的过程。 1、概念： 2、诱导融合的因素 化学法：聚乙二醇(PEG)诱导融合. 物理法：电激融合 生物法：灭活的病毒诱导融合. 病毒颗粒黏 附细胞表面 细胞膜连接 细胞膜被 病毒颗粒穿通 细胞融合、形成杂种细胞 为什么灭活的病毒能作诱导剂？ 灭活丧失感染性但保留融合活性 获得杂种植株 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 　　 物理（离心、振 荡、电激） 化学（聚乙二醇） 直接诱 导细胞融合 去壁—原生质体 融合—诱导新壁 —杂种植株 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 结果　 诱导方法 步骤　 融合的原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 获得杂交细胞 小结 3、动物细胞融合技术的意义和应用 问题：抗体由什么细胞产生？其化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？ 二、单克隆抗体的制备 抗体的传统生产方法： 从血清中分离抗体 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差。 多种浆细胞 动物体内 多种抗体 抗原 提示：每一个效应B淋巴细胞只分泌一种化学性质单一，特异性强的抗体。 如果利用单个效应B淋巴细胞进行无性繁殖（克隆），形成细胞群，这样的细胞群就有可能产生出化学性质单一、特异性强的抗体——单克隆抗体。 问题： 怎样获得化学性质单一、特异性强的抗体呢？ 思考：用什么方法才能让B淋巴细胞在体外培养时既能产生抗体又能无限增殖? 杂交瘤细胞 动物细胞培养技术 动物细胞融合技术 单克隆抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量繁殖的细胞 骨髓瘤细胞能无限增殖 + 一个浆细胞只分泌一种特异性抗体 设计方案： 米尔斯坦 科 勒 读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。 单克隆抗体的概念 单: 单个细胞 克隆: 无性繁殖 单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性强的抗体 单克隆抗体的制备 问题思考 Q1 Q2 细胞两两融合后，有哪些类型？ B-B;B-瘤;瘤-瘤 哪种是需要的类型，要筛选吗？ ①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。 ②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。 ③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，可是能不断分裂增殖。 你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？ 小资料： 单克隆抗体的制备 问题思考 Question 经过选择培养基筛选的杂交瘤细胞群进行克隆是否就得到产生纯度高的抗体？ 还需怎么办？ 有限稀释法 稀释多次 稀释 对能产生特异性抗体的单个杂交瘤细胞 进行克隆，即单细胞克隆。 由它产生的抗体，即单克隆抗体。 将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。 多孔细胞培养板 单克隆抗体 杂交 细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的 选择培养基 第二次筛选 能产生专一抗体的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 4.单抗制备过程中应用了那些技术？ 动物细胞融合、动物细胞培养 1.此过程中至少进行了几次筛选？目的相同吗？ 3.单克隆抗体的优点？ 特异性强，灵敏度高，可大量制备。 2.最终从哪儿提取单克隆抗体？ （1）作为诊断试剂——最广泛应用 准确、高效、简易、快速 （如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤