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细胞转染药物筛选
细胞转染、药物筛选（试行）
第一天 细胞复苏
1、从液氮罐取出一管细胞 ，迅速置于37℃水浴锅中溶化。
2、和9ml FBS-DMEM（双抗）一起转移到14-ml的离心管中。
3、离心1000rpm 5min，负压吸去上清。
4、用FBS-DMEM（双抗）重悬细胞，铺到6孔板上（2ml液体）。
12hr后若死细胞很多需换液
1、负压吸去培养基。
2、加入2ml新鲜的FBS-DMEM（双抗）。
第三天 细胞传代
1、负压吸去培养基，加入2ml PBS，吸去PBS，加入0.5ml Trypsin。
2、室温放置约30秒，吸走胰酶。加入3毫升FBS-DMEM，吹打至单个细胞状态。
3、1：3传代，取2/3平分到2个6孔板的孔内。1孔转染，1孔支原体检测（不含抗性的培养基中连续传3代，最后一次传代后需不换液3天后取细胞做支原体检测）。
4、37度，5%CO2培养。
第五天 细胞传代
1、负压吸去培养基，加入2ml PBS，吸去PBS，加入0.5ml Trypsin。
2、室温放置约30秒，吸走胰酶。加入2毫升FBS-DMEM，吹打至单个细胞状态。
3、细胞计数，传代。使细胞数达到6*105个/毫升，取2毫升/孔加到2个孔内。（与支原体检测孔分开操作）
4、37度，5%CO2培养。
第六天 转染
观察细胞，若状态良好，且细胞密度达到70-80%可以进行细胞转染。
转染前2个小时细胞换上1毫升新鲜的FBS-DMEM（含血清，不含抗生素）。
2个小时后取0.1毫升DMEM（不含药物，不含血清）加入1.5毫升EP管中。
从-20度中取出DNA（1ug/ul）
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