蛋白质测定-12级制药工程-第一实验室.docVIP

生物化学实验报告 姓 名： 余鸿毅 学 号： 3120206046 专业年级： 2012级制药工程 组 别： 生化实验室一 生物化学与分子生物学实验教学中心 实验名称 (Title of Experimetn) 蛋白质的定量测定（双缩脲法） 实验日期 (Date of Experiment) 2013-12-03 实验地点(Lab No.) 第?实验室 合作者(Partner) 黄浩集 指导老师(Instructor) 王妮莎 总分 (Total Score) 教师签名(Signature) 批改日期 (Date) 1、实验原理：蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关，因此被广泛地应用。 2、在一定的实验条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540－560毫微米下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。 实验材料：1、样品：小牛血清 2、试剂：双缩脲试剂，0.15mol/L氯化钠溶液，蛋白质标准液（70g/L），蒸馏水 3、仪器及器材：V-1100分光光度计，恒温水浴箱，试管3支，试管架，加样枪，加样枪架，刻度吸管 实验流程：取3支试管→编号1、2、3→1号加入0.5ml0.9%NaCl→2号加入0.5ml标准蛋白质溶液→3号加入0.5ml小牛血清→分别向三支试管加入4ml双缩脲试液→摇匀→37℃恒温水浴20min→用分光光度计测吸光度→记录数据 实验步骤1、取3支试管，分别编号1、2、3，向1号试管加0.5ml 0.9% NaCl溶液，向2号试管加入0.5ml标准蛋白质溶液，向3号试管加0.5ml小牛血清。 2、再分别向3支试管加入4.0ml双缩脲试剂，摇匀，放置于恒温水箱中，保持37℃20分钟。 3、用空白管调零，在波长540nm下测各分光度，分别测三次，记录数据。 注意事项： 1．本实验方法测定范围6－8mg/ml蛋白质。 2．各管由显色到比色的时间应尽可能一致。 3、双缩脲试剂中要加有酒石酸钠。。 4、用手拿吸光池时，手只能拿磨砂面，不能触碰透光面，加入的液体应为比色杯体积的三分之二左右。 主要实验条件1、双缩脲试剂现配现用。 2、小牛血清和蛋白质标准液都是在低温下保存的。 操作技巧及失误：1、用加样器取液时，按到第一停点就定住，放液时，按到第二停点。 2、用加样器取液时，枪头应伸到液面下，但不能与瓶底接触;释放液体时，应让液体顺着试管壁流下。 实验现象：刚加入双缩脲试剂，2号试管立刻变淡紫色，1号试管和3号试管为蓝色;恒温水浴20分钟后，1号试管不变色，3号试管变为紫色。 实验数据： 管号 测定次数 平均吸光度 1 2 3 S 0.156 0.150 0.150 0.152 U 0.114 0.110 0.114 0.113 实验结果：血清总蛋白（g/L）= 平均Au / 平均As * 蛋白质标准液浓度（g/L） 算得血清总蛋白（g/L）