【参考】人类重要病原体致病机制研究.doc

一、研究内容 本课题研究围绕病原体变异及变异与致病性的关系这个传染病基础研究中的核心科学问题，分别针对乙型肝炎病毒、艾滋病毒和肠道病原菌的生物学及致病特点开展相关研究。 一、乙型肝炎病毒遗传学特征及其致病和致癌相关性研究 本项目主要研究内容包括：（1）分析我国HBV基因型及重组体的分布特点以及与疾病谱和抗病毒治疗应答的关系；（2）研究HBV蛋白和细胞因子相互作用的生物学功能，探讨HBV感染、致病和致癌机理；（3）研究抗原特异性免疫在乙肝发病与转归中的作用及其网络调控机制。 1．分析我国HBV基因型及重组体的分布特点以及与临床疾病谱和抗病毒治疗应答的关系 （1）HBV遗传变异及其分子流行病学研究 （2）病毒因素、宿主因素、核苷类似物抗病毒治疗应答相关性研究 主要包括：①不同HBV基因型肝组织病变的特点，HBV基因型与临床疾病谱和HBeAg血清学转换的关系，基因型与抗病毒治疗应答的关系；②比较研究纯种C和D基因型以及我们鉴定的D/C重组体三种毒株的临床分子病毒学特点；③将重组体的重组区域与纯种基因型原位置换，应用转染细胞系研究D/C重组体与纯种C和D基因型对病毒复制和抗原表达的影响；同时共转染遗传背景不同的细胞系，研究有无毒株选择优势；④在系统分析不同基因型和重组体基因组学特点的基础上，优化和改进现有HBV基因分型方法，提出新的基因分型体系。 2． 研究HBV蛋白和细胞蛋白相互作用的生物学功能，探讨HBV感染、致病和致瘤的分子机理 （1）建立以杆状病毒为载体的HBV感染新技术平台，筛选与HBV感染相关的细胞因子及其功能性研究 （2）研究与HBV病毒复制、转录、病毒颗粒装配相关的基因在HBV病毒生活周期中的功能 （3）探索HBV感染的受体和辅助受体 （4）分离、鉴定与HBx蛋白相互作用的新细胞蛋白 （5）与HBx相互作用蛋白因子的表达差异研究 （6）超表达HBx蛋白及其相互作用细胞蛋白对细胞生理功能的和HBV病毒的影响 （7）抑制与HBx蛋白相互作用蛋白表达后对细胞生理活性和HBV病毒的影响 （8）在实验动物水平HBx蛋白及其相互作用蛋白的功能性研究 利用Bac-to-Bac杆状病毒真核表达系统，构建含有完整HBV基因组的重组杆状病毒。利用该重组病毒感染不同肝细胞，选择一个或几个合适的细胞系作为研究HBV的分子生物学和药物的筛选的平台。利用杆状病毒能转导不同的肝细胞的特性，利用Microarray分析重组HBV感染前后细胞的转录谱，结合差减文库来筛选与HBV感染相关的基因。采用蛋白质二维电泳、质谱，结合蛋白质组学和噬菌体展示文库，最新的组织表达蛋白或者DNA芯片等现代生物学技术分离并鉴定HBV感染相关的受体和辅助受体。 采用酵母双杂交系统筛选和差异表达文库分析等方法，寻找与HBx蛋白相互作用的细胞蛋白，研究HBx蛋白与其相互作用细胞蛋白对细胞凋亡、细胞转化、增殖等生物学功能。在细胞和组织水平上分析HBx蛋白相互作用细胞因子的表达差异，研究新的相互作用细胞因子的生物学功能。HBx蛋白与激活的ras、Myc等肿瘤因子相互作用对细胞转化以及试验动物致瘤性的影响，并借助现代分子生物学、细胞生物学、分子病毒学技术阐明HBx蛋白及其相互作用的细胞蛋白对细胞凋亡、生长特性等的影响作用途径，深入探讨HBV致病和致癌的分子机制。 3．研究抗原特异性免疫调节T细胞在病毒性肝炎发病与转归中的作用及其网络调控机制 （1）中国旱獭嗜肝病毒急、慢性感染模型的建立中国旱獭嗜肝病毒模型在HBV感染相关疾病研究中的实际应用 r在调节机体产生适度的免疫反应以清除肝炎病毒、抵抗感染中的作用和作用机制 （4）CD4或CD8淋巴细胞耗尽后对MHV-3所致重症肝炎炎性反应的影响 （5）特异性Tr 包括DN Tr 的MHV-3抗原特异性免疫保护作用和机制 （6）研究特异性Tr细胞包括DN Tr在乙型肝炎发病中的作用、机制及应用 （7）特异性Tr 和DN Tr 的HBV抗原特异性免疫保护作用和机制 拟建立旱獭嗜肝病毒动物模型，不仅价格便宜且容易获得，适合在中国推广使用，而且该动物模型是建立在国际认可的土拨鼠模型的基础上，能得到国际同行的认可和接受。因此这种适合中国国情的经济适用的嗜肝病毒动物模型的建立，不仅将为研究HBV感染的发病机制和筛选合适的抗病毒药物和治疗性疫苗提供很好的技术平台和研究工具，而且将大幅度提高我国在HBV感染相关疾病研究上的整体水平。 预防疫苗无应答、治疗性疫苗免疫和HBV免疫损伤机理,调节信号通路和效应蛋白的影响。 三、艾滋病毒变异与流行和致病及免疫机制的研究 HIV对宿主的感染是完整而有序的连贯过程，涉及宿主的信号系统、膜系统和细胞骨架系统。HIV的变异及重组是影响病毒的流行和致病性的主要因素，而机体的免疫反应在宿主抗病毒防御中起决定性作用，HIV