【参考】神经元信息感受重要蛋白质膜转运的结构基础调控及功能研究.Doc

一、研究内容 （1）离子通道和受体的内质网质量控制机制：系统分析电压门控钠离子和钙离子通道、谷氨酸受体通道及G蛋白偶联受体的内质网驻留/返流信号，发现新的内质网驻留/返流信号和关键结构域，筛选参与离子通道/受体内质网质量控制的关键相互作用蛋白，探讨蛋白磷酸化的调节作用，提出内质网质量控制新的分子机制； （2）离子通道和受体的囊泡分选、转运和调节机制：分析离子通道/受体转运的囊泡类型和转运模式，筛选和鉴定与转运环节相关的蛋白质复合物组分、离子通道和受体分选的分子内部信号及其相互作用和调控机制，研究马达蛋白和细胞骨架在离子通道和受体的囊泡和细胞器转运中的作用和机制； （3）受体膜表面和突触定位、内化及再循环过程及其机制：分析谷氨酸受体、G蛋白偶联受体及酪氨酸激酶受体在神经元膜表面分布、突触定位、内化及再循环的分子和细胞机制，解析相关的受体结构域、调控位点及相互作用蛋白，探讨磷酸化和泛素化对相关环节的调控； （4）离子通道的膜转运与神经元兴奋性调控：探讨电压门控钠离子和钙离子通道转运插入细胞膜数量的调控机制，分析离子通道在细胞膜上数量的改变对其电流和神经元兴奋性变化的贡献，提出离子通道膜转运调控神经元递质释放和信号传导的新机制； （5）突触后受体的动态变化与突触可塑性：研究在突触可塑性产生过程中突触后受体（特别是谷氨酸能受体）的数量和构成的动态变化及其受体亚型对不同类型突触可塑性形成的作用，探讨关键激酶和磷酸酶参与该过程协同调控机制，提出调节受体转运影响突触可塑性的新机制。 二、预期目标 （一）总体目标 在基础理论研究方面： 系统分析电压门控钠离子和钙离子通道、谷氨酸受体通道、G蛋白偶联受体及酪氨酸激酶受体膜转运所依赖的分子内部信号和关键结构域，重点解析并得到新的内质网驻留/返流、内吞、囊泡转运和分选信号关键结构域 鉴定参与电压门控钠离子和钙离子通道、谷氨酸受体通道、G蛋白偶联受体及酪氨酸激酶受体膜转运的关键相互作用蛋白，阐明磷酸化泛素化调控提出新的相互作用模型 阐述电压门控钠离子和钙离子通道、谷氨酸受体通道、G蛋白偶联受体及酪氨酸激酶受体膜转运对神经元兴奋性和突触可塑性的调控作用，深化离子通道和受体膜转运对神经信息处理调控的认识. 成果考核指标： 在国际一流杂志（IF10）发表论文篇，在有影响力的杂志（IF5）上发表论文篇。 . 人才培养：培养研究生0 - 80人，3 - 5名。 学术思路 蛋白质是生命活动执行者蛋白质，对上述的蛋白质活动过程进行系统研究，做出国际水平的研究工作我国在领域地位。技术途径 研究 离子通道和受体的内质网质量控制机制 离子通道/受体要表达到细胞膜上并履行其功能，必须首先要通过内质网的质量监控。只有正确折叠，装配，暴露出一些前向运输信号或者屏蔽掉ER滞留/返流信号，甚至是具备正常功能的离子通道/受体才能表达到细胞膜上。否则，它们将被滞留在内质网，或者启动内质网相关降解途径（ER associated degradation, ERAD）被降解，或者因过分堆积而引起相应的病理过程。到目前为止，一些神经系统相关的重要离子通道/受体的内质网质控机制并不是非常清楚，即便有些离子通道/受体虽然鉴定出存在某种内质网驻留/返流信号，但是其内在的分子机制不是非常清楚，这些信号是如何发挥作用，又是如何被屏蔽的还需要进一步探讨。因此，我们拟以电压门控钠离子通道系统分析，发现新的内质网驻留/返流信号和关键结构域，筛选参与内质网质量控制关键作用蛋白，提出内质网质量控制新的分子；探讨电压门控钠离子通道内质网驻留/返流的调节作用 离子通道和受体的内质网质量控制机制研究技术途径示意图 离子通道和受体的囊泡分选、转运和调节机制 离子通道和受体的囊泡分选、转运和调节机制 神经元的轴突和树突是神经元与神经元相互信息传递及感受外界化学和物理信息的最主要的部位，主要负责信息感受的离子通道和受体在神经元的胞体合成后，要通过囊泡转运到细胞膜，这些囊泡更要通过轴浆运输的方式向轴突和树突转运（正向运输），插入到轴突和树突的细胞膜上，介导神经元的信息加工过程。同时，神经末梢的一些受体在受到其激动剂的作用后被激活，进入内吞小体的囊泡状结构，经轴浆运输的方式将信号传递到胞体（逆向运输），影响神经元中一些基因的表达调控，从而调节神经元的功能。目前，在离子通道/受体转运的囊泡类型、转运模式、蛋白序列的结构基础、相互作用蛋白和调控机制方面远未阐述清楚。因此，本研究将以电压门控的钠离子通道和钙离子通道、配体门控的离子通道（谷氨酸受体、P2X3受体和TRPV1受体）等的囊泡转运作为切入点，利用分子克隆、神经元培养和转染、活细胞成像技术动态描述离子通道/受体转运的囊泡类型和转运模式，采用囊泡分离、免疫共沉淀和质谱等