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20（S）原人参二醇奥克梯隆型差向异构体大鼠排泄研究 　　[摘要] 20（S）-原人参二醇奥克梯隆型差向异构体为20（S）-原人参二醇的主要代谢产物，前期研究发现，该差向异构体在药效学和药动学方面均有一定的立体选择性。该文建立了HPLC-MS/MS测定大鼠尿液、粪便和胆汁中的24R-差向异构体和24S-差向异构体，考察口服灌胃给予大鼠24R-差向异构体或24S-差向异构体后，在尿液、粪便和胆汁中的排泄情况。结果显示，24R-差向异构体和24S-差向异构体在口服给药后48 h内粪便排泄累积量分别为给药剂量的17.69%，17.09%，基本不经尿排泄。口服给药后48 h内，24R-差向异构体和24S-差向异构体胆汁排泄累积量分别为给药剂量的8.01%，1.47%，前者是后者的5.4倍，具有明显的立体选择性。 　　[关键词] 20（S）-原人参二醇；奥克梯隆型；差向异构体；药物排泄 　　人参为五加科植物人参Panax ginseng C.A. Meyer的根[1]，是我国传统的名贵中草药材，在临床和日常生活中得到广泛使用。现代研究表明，人参中含有人参皂苷、人参多糖、蛋白质、多肽等多种化学成分，其中人参皂苷为主要活性成分。目前，已经从各类人参中分离得到了80多种人参皂苷[2]。由于人参皂苷具有重要的药用价值，近年来，对于人参皂苷的药效学和药动学研究成为热点。其中对于人参皂苷的排泄研究也有不少报道，如一些学者进行了人参皂苷Rg1，Rb1，Rg3，伪人参皂苷GQ在大鼠体内的排泄研究[3-5]。人参皂苷属于四环三萜类化合物，其基本分子结构中含有多个手性碳原子，尽管很多学者对手性C20，C24等引起的药理药效及药代动力学方面的立体选择性差异进行了研究报道[6-9]，发现S-型与R-型差向异构体具有不同的药理活性及不同的药代动力学特性，却鲜有研究这些差向异构体在排泄方面的立体选择性。 　　（20S，24R）-环氧-达玛烷-3β，12β，25-三醇即20（S）-原人参二醇奥克梯隆R型差向异构体（简称24R-差向异构体）和（20S，24S）-环氧-达玛烷-3β，12β，25-三醇即20（S）-原人参二醇奥克梯隆S型差向异构体（24S-差向异构体）是20（S）-原人参二醇在人肝微粒体和大鼠体内外研究中的主要代谢产物[10-11]。而且研究表明24R构型在药效和药动学方面均优于24S构型[9，12]。本文对20（S）-原人参二醇奥克梯隆型差向异构体的排泄行为进行研究，考察其排泄的立体选择性。 　　1材料 　　1.1药物与试剂 （20S，24R）-环氧-达玛烷-3β，12β，25-三醇即20（S）-原人参二醇奥克梯隆R型差向异构体（简称24R-差向异构体）和（20S，24S）-环氧-达玛烷-3β，12β，25-三醇即20（S）-原人参二醇奥克梯隆S型差向异构体（24S-差向异构体）由本课题组从20（S）-原人参二醇合成并纯化得到，纯度≥98%。丹参酮ⅡA（纯度≥98%）购于成都曼斯特有限公司。葡糖醛酸酶购于美国Sigma公司。乙腈为色谱纯购于德国Merck公司，其余试剂均为分析纯。实验用水为去离子水。 　　1.2仪器 TSQ QUANTUM ACCESS型三重四极杆串联质谱仪，配有ESI源以及Xcalibur数据处理软件（美国ThermoFisher公司）；Agilent 1100 自动进样液相色谱系统，包括四元输液泵，自动进样器，柱温箱（美国Agilent公司）；XW-80A涡旋混合器（上海精科实业有限公司）；HSC-24A氮吹仪（天津市恒奥科技发展有限公司）；TGL-16G高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）等。 　　1.3动物 成年SD雄性大鼠，体重220～350 g，有山东绿叶制药有限公司实验动物中心提供，所有动物饲养在（19±1） ℃，湿度50%±5%环境中。实验前大鼠禁食12 h，但自由进水。所有动物试验均遵循欧盟动物试验原则进行。 　　2方法 　　2.1储备液及工作液的配制 分别精密称取24R-差向异构体、24S-差向异构体及丹参酮ⅡA（内标）适量，溶于一定量乙腈中配成质量浓度为1 g·L-1的储备液，置于4 ℃冰箱中备用。取适量体积的24R-差向异构体、24S-差向异构体的储备液，用流动相稀释成系列浓度的工作液，待用。精密量取内标储备液适量，用流动相稀释为200 μg·L-1的内标工作液，所有储备液和工作液均置于4 ℃冰箱中备用。 　　2.2LC-MS/MS条件 色谱柱Shim-pack XR-ODS C18柱（2.1 mm×50 mm，2.2 μm）；流动相乙腈-水 85∶15（含0.2%甲酸），含0.05%冰乙酸；流速0.3 mL·min-1。质谱采用电喷雾离子化电离源（ESI），正离子模式选择性反应监测，喷雾电压