食品中乙草胺测定.docVIP

乙草胺残留量检测方法 本标准参考/T 2322-2009《》制定，适用于三河汇福生物科技有限公司化验室测定中。 1 原理 试样中的乙草胺残留物用乙腈或乙酸乙酯提取，经凝胶渗透色谱仪（GPC）和/或硅胶固相萃取柱（SPE）净化，用气相色谱法（GC）测定和气相色谱-质谱法（GC-MS）确证，外标法定量。 2 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为色谱级，水为重蒸馏水。 2.1 正己烷 2.2 乙酸乙酯 2.3 环己烷 2.4 乙腈 2.5 丙酮 2.6 无水硫酸钠：分析纯；650℃灼烧4h，储于密封容器中备用。 2.7 乙酸乙酯：正己烷：3+97（体积比） 2.8 乙酸乙酯：正己烷：5+95（体积比） 2.9 乙酸乙酯：环己烷：50+50（体积比） 2.10 乙草胺标准品（acetochlor,C14H20ClNO2,CAS No.:34256-82-1）：纯度大于等于98% 2.11 乙草胺标准溶液：准确称取适量的乙草胺标准品，用丙酮配成浓度为100μg/的标准储备液。根据需要将标准储备液用正己烷稀释成适当浓度的标准工作液。标准储备液和标准工作液避光在0℃~4℃条件下贮存。有效期6个月。 3 仪器与设备 3.1 气相色谱仪：配微池电子捕获检测器（μ-ECD） 3.2 气相色谱-质谱仪：配电子轰击源（EI） 3.3 凝胶渗透色谱仪 3.4 旋转蒸发仪 3.5 离心机：5000r/min 3.6 高速均质器 3.7 硅胶固相萃取柱：6/1000mg，或相当者；使用前用10正己烷淋洗 3.8 离心管：100，塑料和玻璃 3.9 滤膜：0.45μm，有机相 4 试样制备与保存 粮谷和坚果类：取花生、玉米、小麦、大豆、腰果等有代表性样品约500g，用粉碎机粉碎，混匀，装入洁净的容器内，密闭并标明标记。4℃以下保存。 5 测定步骤 5.1 提取 粮谷、坚果：称取试样10g（精确至0.1g）于100塑料离心管中，加入50乙腈，在匀浆器上匀浆2min。以4000r/min离心10min，将上清液倒入浓缩瓶中，浓缩至干，用10乙酸乙酯-环己烷溶液（2.9）溶解残渣，过膜，共凝胶渗透色谱（GPC）净化。 5.2 净化 5.2.1 凝胶渗透色谱净化条件 色谱柱：S-X3 20×2cm（内径），或相当者 流动相：环己烷-乙酸乙酯（1+1，V/V） 流速：5.0/min。 进样量：5.0 淋洗体积：40 收集体积：30 清洗体积：10 5.2.2 硅胶渗透色谱净化 将5.1中粮谷、坚果和禽肉组织的提取液过滤膜（3.9）注入凝胶渗透色谱仪中，收集40~70ml流出液，在40℃水浴上减压浓缩至干，用1正己烷溶解残渣，供固相萃取柱净化。 5.2.3 硅胶固相萃取柱净化 将6.2.2净化液注入硅胶固相萃取柱（3.7）中，再用2×1正己烷润洗盛样液容器，注入硅胶柱中，依次用10正己烷、5乙酸乙酯-正己烷溶液你（2.7）和5乙酸乙酯-正己烷溶液（2.8）淋洗，再用15乙酸乙酯-正己烷溶液（2.8）洗脱，收集洗脱液于40℃水浴减压浓缩至干，用正己烷定容至5，供气相色谱测定和气相色谱-质谱确证。 5.3 测定 5.3.1 气象色谱条件 色谱柱：DH-5石英毛细管柱，30m×0.32mm（内径），膜厚0.25μm，或相当者； 色谱柱温度：60℃（1min）15℃/min 260℃（5min），300℃（后运行15min）； 进样口温度：250℃； 检测器温度：325℃； 载气：氦气，纯度≥99.995%，1.8/min； 进样量：1μ； 进样方式：无分流进样，0.75min后开阀。 5.3.2 气相色谱-质谱条件 色谱柱：DB-5MS石英毛细管柱，30m×0.25mm（内径），膜厚0.25μm，或相当者； 色谱柱温度：60℃（1min）15℃min 260℃（5min），300℃（后运行15min）； 进样口温度：250℃； 色谱-质谱接口温度：280℃； 载气：氦气，纯度≥99.995%，1.0/min； 进样量：1μ； 进样方式：无分流进样，0.75min后开阀； 电离方式：EI； 电离能量：70eV； 测定方式：选择离子监测方式（SIM）； 监测离子（m/z）：定量162，定性174、234、269； 溶剂延迟：3min。 5.3.3 气相色谱测定 根据样液中乙草胺含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中乙草胺响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，乙草胺的保留时间约为12.3min。 5.3.4 气相色谱-质谱确证 乙草胺标准溶液及样液均按5.3.2规定的条件进行测定，如果样液与标准溶液相同的保留时间有峰出现，则对其进行质谱确证。经确证分析被测物SIM色谱峰保留时间