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实验四定磷法测定核酸含量
实验四 定磷法测定核酸含量
一、目的
掌握定磷法测定核酸含量的原理与方法。
二、原理
核酸分子中含有一定比例的磷，RNA中含磷量为9.0％，DNA中含磷量为9.2％，因此通过测得核酸中磷的量即可求得核酸的量。
用强酸使核酸分子中的有机磷消化成为无机磷，使之与钼酸铵结合成磷钼酸铵（黄色沉淀）。
PO42-+3NH4++12MoO42-+24H+ NH4 3PO4·12 MoO3·6H2O↓+6H2O
当有还原剂存在时，Mo6+被还原成Mo4+，此4价钼再与试剂中的其他MoO42-结合成Mo MoO4 2或Mo3O8，呈蓝色，称为钼蓝。
在一定浓度范围内，蓝色的深浅和磷含量成正比，可用比色法测定。样品中如有无机磷，应将无机磷扣除，否则结果偏高。
三、实验器材
1、粗核酸（RNA）
2、克氏烧瓶50ml（X2））））））））））M：样品质量（μg）。
六、思考题
1.采用紫外光吸收法测定样品的核酸含量，有何优点及缺点？
2.若样品中含有核苷酸类杂质，应如何校正？
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