第五章固相析出分离法资料.pptVIP

第五章 固相析出分离法 ? 通过改变溶液条件，使溶质以固体形式从溶液中分出的操作技术。 ? 盐析法 ? 有机溶剂沉淀法 ? 等电点沉淀法 ? 结晶法 第一节 盐析法(salt precipitation) 定义：盐析法是利用各种生物分子在浓盐溶液中溶解度的差异，通过向溶液中引入一定数量的中性盐，使目的物或杂蛋白以沉淀析出，达到纯化目的的方法。 优点：简单、经济、较少变性 缺点：分辨率不高，要除盐 两种现象： 盐溶：低盐情况，盐离子强度的增高，蛋白质溶解度增大 盐析：高盐，盐离子强度增加，蛋白质溶解度减小 一、基本原理 原 理 ? 形成离子对，部分中和了蛋白质的电性，排斥作用减弱而能相互靠拢，聚集起来。 ? 中性盐的亲水性比蛋白质大，使蛋白质脱去了水化膜，使其沉淀。 在盐析区，符合公式 logS=β-Ksμ S——蛋白质溶解度，g/L； μ—盐离子强度, Ci——i离子浓度，mol/L； Zi——i离子化合价； β——常数,为纵坐标上的截距; Ks——盐析常数。 β、KS ? β为纵坐标上的截距，是外推截距，与无机盐种类无关。 ? KS是盐析常数，与蛋白质和盐的种类有关，但与温度和pH无关。 ? 两种类型： （1）在一定的pH和温度下改变离子强度（盐浓度）进行盐析，称作KS盐析法。 （2）在一定离子强度下仅改变pH和温度进行盐析，称作β盐析法。 二、影响盐析的因素 （一）、无