6小量质粒DNA提取操作.docVIP

小量质粒DNA提取操作过程 Omega.Eazy nucleic Acid I solation E.Z.N.A. plasmid miniprep Kit I 1.5ml-5ml的菌液 ↓离心13000g, 1min，加250ulSolutionⅠ/Rnase A。涡旋悬浮↓加250ulSolutionⅡ温柔颠倒EP管使产物澄清，室温孵育2-4 min↓（不用时拧紧加350ulSolutionⅢ并颠倒直到见白色沉淀↓离心1000g, 10min可见紧质白色沉淀,立即小心上清加入↓离心1000g, 1min弃滤液，加500ul Buffer Hb 于, 去除残留蛋白.↓离心1000g, 1min弃滤液，加700ul加乙醇的Wash Buffer 洗柱1min ↓离心1000g, 1min重复上步骤一次 可选 ↓液，空离↓13000g, 1min将柱子放入1.5mlEP管加入0ul超纯水1-2min. ↓离心13000g, 1min -20℃保存 为了质粒而准备的细胞培养应该从新鲜的平板中的单克隆生长来,从从甘油或液态培养基中直接进行subculturing 分部培养 很可能造成质粒产量的不稳定,或丢失.用新鲜的转化产物或新鲜streaked平板上的分离的单克隆用合适的培养体积合适的培养基及抗生素37℃摇菌16H,这样能得到较好的结果.为了较高的质粒产量,开始的体积要基于细胞的密度,,建议OD600在2.0-3.0.太高的菌液密度会超过纯化试剂的承载能力. 需要自己准备的: 离心机至少13000rcf 灭菌离心管1.5ml或2ml 无水乙醇 灭菌的15-50ml的离心管 D6945 重要提示: 把额外提供的RNase A 加入Solution Ⅰ ,在4℃ 保存 将Solution Ⅱ, Solution Ⅲ中盐沉淀加热到37℃ 保证沉淀完全溶解. 用无水乙醇稀释DNA Wash Buffer 浓缩液, “00”加如6ml;“01”加入60ml;“02”加入60ml. 保存于室温. 所有步骤在室温下进行. 安全信息: Solution Ⅱ :氢氧化钠, 刺激. Solution Ⅲ: 乙酸, 刺激. Buffer: 异丙醇, 易燃. RNase A: 核酸酶, 敏化剂. The E.Z.N.A.? Plasmid Mini Kit I D6942/6943/6944 30ug of high-quality plasmid DNA from 1-5ml bacterial cultures The E.Z.N.A.? Plasmid Mini Kit II D6945 60ug of high-quality plasmid DNA from 10-15ml bacterial cultures