第8章分子生物学研究方法（6学时）.docVIP

教 案 首 页 教师姓名：肖建英 职称：教授 课程名称 医学分子生物学 章 节 第8章 分子生物学研究方法 授课对象 医学相关专业硕士研究生 授课时间 按教学日历安排 授课学时 6学时 授课地点 研究生教室 教学 目的 与要 求 1、掌握基因工程工具酶：限制性内切酶、DNA连接酶、反转录酶等作用，回文结构的概念。 2、掌握目的基因、基因载体、重组技术的基本原理与步骤。 3、掌握PCR原理；熟悉RT-PCR、Real-time PCR应用 4、熟悉分子杂交和印迹技术、RNA基本操作技术 5、了解蛋白质学技术、蛋白质及RNA相互作用技术、SNP的理论与应用 教学 重点 与难 点 重点：1、基因工程工具酶。目的基因、基因载体、重组技术的基本原理。 2、PCR原理、RT-PCR、Real-time PCR 3、分子杂交和印迹技术 4、RNA基本操作技术 难点：1、蛋白质组与蛋白质学技术 2、蛋白质及RNA相互作用技术 3、利用酵母鉴定靶基因功能 教学 方法 讲授式＋启发式＋问题式 教具 黑板 + 多媒体 板书 提纲 基因工程技术的基本步骤。 教学 步骤 第一节 基因工程基本技术 一、重组DNA技术的发展史 10min 二、重组DNA技术相关概念 工具酶、目的基因、基因载体 40min 三、重组DNA技术基本原理及操作步骤 四、 重组DNA技术与医学的关系 5min 第二节 聚合酶链反应技术 PCR反应原理 10min PCR反应条件的优化 5min PCR引物的设计 10min PCR反应模板的准备 5min 耐热DNA PCR产物的检测 5min PCR的污染及对策 5min PCR技术的应用 5min 九、几种重要的PCR衍生技术 （一）反转录PCR技术（RT-PCR） 5min （二）原位PCR技术 5min （三）实时PCR技术20min 第三节 分子杂交和印迹技术 20min 一、核酸分子杂交与印迹技术的原理 二、印迹技术的类别及应用 三、生物芯片——基因芯片 第四节 RNA基本操作技术 20min 一、总RNA的提取 二、 mRNA的纯化 三、 cDNA的合成 四、 cDNA文库的构建 五、 基因文库的筛选 第五节 SNP的理论与应用 10min 一、 SNP概述 二、SNP的检测技术 三、 SNP的应用 第六节 蛋白质组与蛋白质学技术 20min 一、双向电泳技术 二、 蛋白质印迹法 三、蛋白质的质谱分析技术 四、凝胶阻滞实验（EMSA） 五、噬菌体展示技术 六、 免疫共沉淀技术 七、 蛋白质磷酸化分析 第七节 蛋白质及RNA相互作用技术 35min 一、 酵母单杂交系统 二、 酵母双杂交系统 三、体外蛋白质相互作用技术 四、 细胞内蛋白质相互作用研究 五、RNAi技术及其应用 第八节 利用酵母鉴定靶基因功能 15min 一、 酵母的遗传学和分子生物学简介 二、酵母基因转化与形状互补 三、 外援基因在酵母中的功能鉴定 思考 题或 作业 1、基因重组技术基本原理是什么？ 2、试述RT-PCR、Real-time PCR技术的原理与操作特点 3、简述分子杂交和印迹技术的原理 4、试述酵母单杂交系统的愿意 课后记