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PCR引物设计 汕大医2009级 闫银侠 1座机电话号码68 PCR 引物设计 PCR 的基本原理 PCR引物设计的基本原则 常用PCR引物设计软件 Primer Premier 5.0 介绍 PCR 的基本原理 引物 引物的概念 引物是一段寡聚核苷酸序列，它是PCR特异反应的关键。 引物的种类 PCR引物 测序引物 杂交探针 简并引物 其他引物 引物的作用 基因获得，测序以及检测等。 引物设计的原则 三条最基本的原则： 引物与模板的序列要紧密互补 引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构 引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应 即错配 。 主要影响因素 引物长度 产物长度 序列Tm 值 引物与模板形成双链的内部稳定性 形成引物二聚体及发夹结构的能值 在错配位点的引发效率 引物及产物的GC 含量 引物设计的要点 引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 引物长度一般在15-30bp之间，常用的是18-27bp，不应超过38bp。 引物过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应。 引物G+C的含量在40%-60%之间，Tm值最好接近72℃。 上下游引物的Tm值是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度。Tm值 解链温度 4 G+C ＋2 A+T ； 有效启动