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三种印迹技术的比较 RNA印迹技术 (Northern blotting) 2010.03.28 Northern blot 印迹杂交原理示意图 制备待测核酸样品 分离、变性、转移、固化RNA片段 预杂交 制备核酸探针 标记核酸探针 加入标记核酸探针 核酸分子杂交（固相杂交）操作程序 杂交 漂洗去除未参与杂交的标记探针 检测杂交信号 （一）RNA的提取及质量检测 RNA的提取 紫外吸收检测RNA的纯度和浓度 1.取RNA样品5ul，用水稀释50-100倍，转入分光光度计的石英比色杯中。 2.在260nm和280nm分别读出样品OD值。根据260nm时RNA浓度=OD260×40ug/ml×稀释倍数。 3.若OD260/ OD280小于2，说明可能有DNA片段污染，可用无Rnase的Dnase处理样品。 （一）RNA的变性电泳 原理：RNA的二级结构使得RNA不能严格按 照其分子质量的大小在琼脂糖电泳中分离， 所以进行RNA电泳时，RNA必须经过变性剂 处理使二级结构解体，泳动时才能按分子质 量大小分离。 试剂：10×MOPS(0.2mol/L 3-N-吗啉-丙磺酸； 0.05mol/L 醋酸钠； 0.01mol/L EDTA）、RNA上样 缓冲液（去离子甲酰胺0.72ml；10×MOPS 0.16ml； 37%甲醛0.26ml；0.1%DEPC水0.18ml；80%甘油0