第十八章全自动DNA 测序仪和蛋白质自动测序仪习题参考答案.doc

第十八章 全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪习题 参考答案 一、名词解释 1．端，称为荧光标记引物法。 2． 3．DNA测序反应常用的一种荧光标记方法。将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的端，当相同碱基排列的寡核苷酸链作为骨架分别被4种荧光染料标记后，便形成了一组（4种）标记引物。特定颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核苷酸底物保持对应关系。 4．DNA测序反应常用的一种荧光标记方法。将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上。反应中将4种ddNTP分别用4种不同的荧光染料标记，带有荧光基团的ddNTP在掺入DNA片段导致链延伸终止的同时，也使该片段端标上了一种特定的荧光染料。根据荧光颜色的不同来判断所代表的不同碱基信息。 5．Edman6．Sanger双脱氧链末端终止法dNTP外，还有ddNTP。ddNTP可掺入到正在延伸的DNA链中，但不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，从而使正在延伸的DNA链在此终止。由于存在ddNTP与dNTP的竞争，生成的反应产物是一系列长度不同的多核苷酸片段。 7．平板电泳型DNA测序仪：为DNA测序仪的一种类型。平板型电泳的凝胶灌制在两块玻璃板中间，聚合后厚度一般小于0.4mm或更少，因此又称为超薄片层凝胶电泳。它具有样品判读序列长（600bp～900bp1．B 2．C． 3．E 4．D 5．C． 6．B 7．C． 8．E 9．A 10．D 11．D 12．E 13．C．14．C． 15．C 16．B 17．B 18．C． 19．C． 20．D 21．E 22．A 23．D 24．D 25．D 26．A 27．A 28．E 【X型题】 1．BC． 2．BCE 3．ABC． 4．ABCD 5．ABCD 6．ABCD 7．ABCD 8．ACD 9．ABCD 10．BCDE 11．BDE 12．ABDE 13．ABE 14．ACDE 15．BCDE 三、简答题 1dNTP外，还有ddNTP。反应过程中ddNTP虽然可以与正在延伸的DNA链的末端形成磷酸二酯键而掺入到DNA链中，但它们本身没有-OH，不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，从而使正在延伸的DNA链在此终止。据此原理分别设计四个反应，每一反应中存在相同的DNA模板、引物、四种dNTP和一种ddNTP(如ddATP)，则新合成的DNA链在可能掺入正常dNTP的位置都有可能掺入ddNTP而导致新合成链在不同的位置终止。由于存在ddNTP与dNTP的竞争，生成的反应产物是一系列长度不同的多核苷酸片段。通过PAGE对长度不等的新生链进行分离后，就可根据片段大小直接读出新生DNA链的序列。 2. 简述多色荧光标记引物法的原理。 答：荧光标记引物法是指将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的端。当相同碱基排列的寡核苷酸链作为骨架分别被4种荧光染料标记后，便形成了一组（4种）标记引物。这四种引物的序列相同，但端标记的荧光染料颜色不同。在测序反应中，模板、反应底物、DNA聚合酶及标记引物等按A、T、C、G编号被置于4支微量离心管中，A、T、C、G四个测序反应分管进行，上样时合并在一个泳道内电泳。特定颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核苷酸底物保持对应关系。 3. 简述多色荧光标记终止底物法的原理。 答：荧光标记终止底物法是指将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上。反应中将4种ddNTP分别用4种不同的荧光染料标记，带有荧光基团的ddNTP在掺入DNA片段导致链延伸终止的同时，也使该片段端标上了一种特定的荧光染料。经电泳后将各个荧光谱带分开，根据荧光颜色的不同来判断所代表的不同碱基信息。 4. 荧光标记引物法和荧光标记终止底物法有哪些不同之处？ 答：荧光标记引物法是将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的端。荧光标记终止底物法是将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上。两种掺入方式的区别在于，前者的荧光染料标记过程和延伸反应终止分别发生在同一DNA片段的两端，且标记发生在引物与模板的退火过程中，而终止是发生在片段延伸过程中，两者在时间上有一定间隔。而后者使标记和终止过程合二为一，两者在同一时间完成。在具体