论文名称(中文) 宿主先天性免疫与流行性感冒病毒A型之交互作用 论文.docVIP

論文名稱 中文 宿主先天性免疫與流行性感冒病毒A型之交互作用 論文名稱 英文 The interactions between the host innate immune system and influenza A virus 研究生 中文 林峻暘 研究生 英文 Chun-Yang Lin 中文摘要 宿主與流感病毒 IAV 之間的先天性免疫反應為複雜的訊息網，最終可能導致臨床上病情的好轉與惡化。RIG-I是細胞內主要偵測IAV感染的胞內受器。然而，對於IAV感染如何活化RIG-I的詳細機制仍尚未釐清。TAPE是目前我們發現新的先天性免疫調控分子，已知能夠調控TLR3/TLR4以及RIG-I like receptor。我們將專注於兩大主軸：第一、研究TAPE在因應IAV感染時調控RIG-I訊息路徑的腳色；第二、研究IAV NS1蛋白干擾RIG-I活化第一型干擾素之路徑的分子機制。抑制TAPE在人類肺臟上皮細胞A549的表現會導致IAV感染時干擾素b的分泌下降。TAPE基因剔除小鼠之纖維母細胞對於IAV感染所活化的干擾素b啟動子與mRNA表現也相較於正常小鼠來得低。此外，利用siRNA降解或基因剔除使細胞內的TAPE缺乏會導致流感病毒感染初期的病毒RNA複製速率上升。另外，在先前的研究已經證明IAV的NS1蛋白會與RIG-I競爭病毒RNA的結合並阻斷為活化RIG-I所進行的ubiquitination。為了更細分探討IAV NS1不同蛋白區域與宿主先天性免疫之間交互作用的詳細機制，我們製造出表現兩種NS1區域的質體：RNA binding區域 RBD 以及effector區域 ED 。利用干擾素b啟動子報導基因分析發現NS1- RBD只能阻斷IAV病毒RNA所刺激的干擾素b啟動子活化，而在poly I:C 另一雙股RNA類似物 刺激之下則沒有此抑制效果。這結果暗指出NS1-RBD能夠辨認IAV病毒RNA上的5’-triphosphate的官能基以避免RIG-I的偵測。此外，NS1全長或NS1-ED則能夠用不以RNA結合的方式阻斷RIG-I所媒介的干擾素b活化。為了探討NS1-ED抑制第一型干擾素的潛在腳色，我們利用免疫共沉降法發現NS1-ED能夠與ubiquitin E3連接酶─TRAF3，此連接酶對於許多先天性免疫偵測蛋白至第一型干擾素的活化所必需。NS1-ED也能抑制由△RIG-I過度表現所活化的TRAF3造成的K63位點的多重泛素化 polyubiquitination 。總結而言，我們的結果顯示TAPE是病毒感染所活化RIG-I訊息中的重要調控蛋白，並且IAV NS1具有以特殊抑制能活化第一型干擾素的TRAF3達到能不以RNA結合的方式阻斷干擾素?產生。我們的研究提供了TAPE於先天性免疫對抗IAV病毒感染的重要性，並發現NS1針對TRAF3以阻斷先天性免疫反應的新的機制。 英文摘要 Host innate immune responses to influenza A virus IAV are complex networks, which may ameliorate or exacerbate clinical outcome. Retinoic acid-inducible gene I RIG-I is a major cytosolic sensor for sensing influenza virus infection. However, the detailed mechanism of RIG-I activation in response to IAV infection is still unclear. TAPE TBK1-associated protein in endolysosomes is a novel innate immune regulator, which modulates the TLR3/TLR4 and RIG-I-like receptor pathways. We focus on two key aspects 1 to study the role of TAPE in regulating the RIG-I pathway in response to IAV infection, and 2 to study molecular mechanisms of how IAV NS1 protein counteracts the RIG pathway to type I IFN production. Knockdown of TAPE in a human lung epithelial cell lin