论文名称(中文) 探讨癌症转移相关蛋白S100A4的生物物理特性 论文.docVIP

論文名稱 中文 探討癌症轉移相關蛋白S100A4的生物物理特性 論文名稱 英文 Biophysical characterization of the cancer metastasis-related protein S100A4 研究生 中文 謝欣倍 研究生 英文 Hsin-Pei Hsieh 中文摘要 S100A4是一個鈣離子結合蛋白質，在分類上屬於S100蛋白質家族，根據過去文獻已得知S100A4參與了癌症腫瘤細胞的轉移。在癌症轉移病人中可以觀察到S100A4蛋白質表現量的上升，因此S100A4蛋白質的表現量與腫瘤細胞的轉移的過是有直接的關聯，至今， S100A4蛋白質表現量也成為臨床上判斷腫瘤轉移的一項重要的指標。S100A4主要是利用兩端 N端和C端 的EF-hand motifs與鈣離子結合。當S100A4與鈣離子結合後會在C端的EF-hand motifs產生顯著的構形上的改變，而這個構形上的改變對S100A4和其他目標蛋白結合來說是重要的。過去研究中指出，將C端鈣離子結合位置進行突變 CM，N65I 和 D67A 或者是將C端的環狀區域的15個胺基酸進行剔除 ΔS100A4 後S100A4與鈣離子結合能力下降，並在小鼠的乳腺細胞中觀察到細胞進行移動和侵襲的能力降低，並顯著的降低了S100A4與目標蛋白質之間結合，因此更進一步的降低了轉移的能力。相反的，上述這些細胞現象在進行N端鈣離子結合位置進行突變 NM，E23A 和D25A 的S100A4的蛋白質中並沒有觀察到。根據這些研究資料我們假設了S100A4蛋白質中將C端區域進行突變之後造成蛋白質結構上的變化因此使得S100A4蛋白質失去原有的生物性功能。故本篇研究主要藉由比較S100A4蛋白質野生株和C端突變株在溶液中的整體構形進而去解釋S100A4蛋白質結構與功能之間的關係。我們首先將3個突變株 NM、CM和 ΔS100A4 重新構築在表現載體上，接著利用親和性鎳離子螯合樹脂色層分析和分子篩選層析法進行蛋白質的純化。從分子篩選層析法實驗中所得到分析結果得知NM和CM均為二聚體的形態存在於溶液之中，但ΔS100A4則以單聚體的形式存在。除此之外，利用圓二色光譜與感應耦合電漿質譜分析儀測試了蛋白質二級結構組成和與鈣離子的結合能力，根據圓二色光譜分析結果指出與其他突變株蛋白相比ΔS100A4具有不同的二級結構組成；另外藉由X光小角度散射技術比較NM和CM在溶液中的構形後得知NM在溶液中的構形和S100A4蛋白質野生株活性狀態的晶體結構是相似的。總結本篇研究得知，S100A4的C端區域對於維持S100A4的結構和功能性來說是相當重要的。 英文摘要 S100A4 is a member of the S100 family of calcium-binding proteins and is involved in tumor metastasis. Elevated S100A4 protein expression is associated with metastatic tumor progression, and is a molecular marker for clinical prognosis. S100A4 binds to calcium through N- and C-terminal EF-hand motifs. S100A4 undergoes a significant conformational change in C-terminal EF-hand motifs when calcium binds. This calcium-dependent conformational change is necessary for S100A4 to interact with its target proteins. Mutation of the C-terminal calcium binding sites on EF hand motif CM, N65I and D67A or deletion of the last 15 amino acids of S100A4 C-terminus ΔS100A4 decreases calcium binding ability, motility/invasion of rat mammary cell line in vitro, and abolishes the interaction with it molecular target. Consequently, these mutants result in the reduction of