生物技术实验第讲.pptVIP

小鼠免疫和细胞融合生物技术学院 董文其  免疫原性弱，一般要加佐剂，常用佐剂主要有福氏 完全佐剂和福氏不完全佐剂。 常用乳化方法：用2～5ml注射器，取1.25ml含抗原 的PBS，另一支注射器取（等体积）福氏完全佐剂或 不完全佐剂，用不锈钢连接接头连接，反复推拉混 合约10～30分钟，平放静置30分钟，如水乳相不再 分离，即可注射小鼠。 小鼠免疫（可溶性抗原） Ag 1～50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射 │(一般0.2～0.5ml/只，0.05～0.1ml/点) ↓3周后 剂量同上，加福氏皮下或不完全佐剂ip │(ip剂量不宜超过0.5ml) ↓3周后 剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip │(5～7天后采血测其效价，检测免疫效果) ↓2～3周后 剂量50～500μg为宜，ip或iv ↓3～5天后 取脾细胞融合 初次免疫 二次免疫 三次免疫 加强免疫 即将两个离体细胞在特殊融合剂的作用下使细胞膜发生一定变化，使两个或多个细胞发生融合，形成体细胞杂交，产生一个新的杂种细胞(Hybrid) 。 细胞融合（cell fusion）： 1.生物方法（病毒） 2.化学方法（PEG） 3.物理方法（电融合） 细胞融合（Cell fusion） 细胞融合材料 骨髓瘤细胞 免疫脾细