选修三教学案系列DNA的粗提取与鉴定.docVIP

选修三教学案系列：DNA的粗提取与鉴定 学习目标：本课题通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质，理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理。DNA的粗提取和鉴定方法。 基础知识梳理 思考讨论 一 .实验原理——提取DNA的方法： 1.提取生物大分子的基本思路: （1）选用一定的 方法分离 。 （2）DNA的粗提取：就是要利用DNA与 、 和 等在________________方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 2.DNA的物理和化学性质： （1）DNA的溶解性： ①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的 溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使 ，而使 ，或者 ，以达到分离目的。 ②DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度_________，DNA会_____， 其他杂质溶解。 ③DNA不溶于 溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。 （2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性： ①蛋白酶能水解 ，但是对 没有影响。 ②大多数蛋白质不能忍受60—80oC的高温，而DNA在 以上才会变性。 ③洗涤剂能够瓦解 ，但对_________没有影响。 (3)DNA的鉴定: DNA在 条件下，DNA遇 会被染成 色，因此_________可以作为鉴定DNA的试剂。 二.实验设计： 1.实验材料的选取：凡是含有 的生物材料都可以考虑，但是使用 的生物组织，成功的可能性更大。 2．破碎细胞，获取含DNA的滤液： （1）动物细胞的破碎（以鸡血细胞为例）：在鸡血细胞液中加入一定量的 ，同时用 搅拌，过滤后收集滤液即可。 （2植物细胞的破碎（以洋葱细胞为例）：在切碎的洋葱中加入一定的 和 ，进行充分的___________，过滤后收集研磨液。 1.DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线如下图即（图5—1），请根据曲线图，思考： ①在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ ②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 2.在下面的生物材料中哪些适合做提取DNA的实验材料？ 鱼卵、猪肝、菜花（花椰菜）、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基的大肠杆菌和哺乳动物的红细胞 3.在动物细胞破碎时，蒸馏水的作用是什么？为什么？ 4.在植物细胞破碎时，洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 5.如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响? 6. 此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 7.为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？[来源 3.去除滤液中的杂质： 方法一： ①在滤液中加入________，使物质的量浓度为________mol/L，_______除去____杂质； ②再调节______溶液物质的量浓度为___mol/L，析出______，_______除去______杂质； ③再用___________溶解DNA。 方法二：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10~15min，嫩肉粉中的_____________能够分解蛋白质。 方法三：将滤液放在________的恒温水浴箱中保温10~15min，注意严格控制温度范围，使蛋白质变性，而DNA分子还未变性，可将DNA与蛋白质分离。 4.DNA的析出与鉴定: （1）DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积 、 ，静置 ，溶液中会出现 ，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒 搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。 （2）DNA的鉴定： ①取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为 的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。②向两支试管中各加入4ml的 。混合均匀后，将试管置于 中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变 。 5.操作提示： ①以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g ，防止 。 ②加入洗涤剂后，动作要 、 ，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作