吉玛RNA手册.docx

PAGE \* MERGEFORMAT 1 PAGE \* MERGEFORMAT 2 PAGE \* MERGEFORMAT 1 THE RNAi COMPANY RNAi 产品使用手册 上海吉玛制药技术有限公司 Shanghai GenePharma Co.,Ltd. Ⅰ. RNAi 简介 1 RNAi 实验原理 RNAi 实验流程 RNAi 实验所需试剂 上海吉玛 RNAi 相关产品 Ⅱ. siRNA 设计 7 A. 哺乳动物 siRNA 设计 B. 上海吉玛 siRNA 产品特性 C. siRNA oligo 技术数据 Ⅲ. siRNA 对照 9 普通阴性对照 荧光标记的阴性对照 siRNA 阳性对照 D. 转染试剂对照 E. 避免 off-target 对照 Ⅳ. siRNA 转染 10 siRNA 转染的方法 RNAi-Mate 转染试剂 RNAi-Mate 适用的细胞类型 转染前细胞培养 RNAi-Mate：siRNA/DNA 比例 贴壁细胞转染程序 悬浮细胞 siRNA 转染程序 DNA 和 siRNA 共转染细胞程序 体内 siRNA 导入方法 siRNA 转染常见问题与建议 Ⅴ. mRNA 水平 RNAi 效果监测 15 siRNA 细胞转染条件优化 Real-Time PCR RNAi 效果检测 Real-Time PCR 结果分析 Ⅵ. 蛋白质水平 RNAi 效果监测 20 western-blot 原理 western-blot 操作步骤 western-blot 上样液的制备 western-blot 常用试剂的配制 Ⅶ. RNAi 实验常见问题解答 22 Ⅰ. RNAi 简介 RNAi 实验原理 RNA 干扰（RNA interfering，RNAi）现象是由与靶基因序列同源的双链 RNA（double-stranded RNA，dsRNA）引发的广泛存在于生物体内的序列特异性基因转录后的沉默过程。细胞中的核糖核酸酶 III 家族成员之一的，dsRNA 特异性的核酸酶 Dicer 将 dsRNA 裂解成由 21-25 个核苷酸组成的小干扰 RNA (small interfering RNA，siRNA)，随后 siRNA 作为介导子引起特异性地降解相同序列的 mRNA，从而阻断相应基因表达的转录后基因沉默机制。 RNAi 实验流程 靶基因确认 靶基因确认 ( Tar g et Gene Identification ) siRNA 设计 （ siRNA Desig n ） RNAi结果检测 ( M e a su r e Kn oc k dow n ) siRNA的转染 ( siR NA Tra n sfec tio n) ( siR NA Gen e rati on) siRNA的制备 功能研究 （ Function R e sear ch ） RNAi 实验所需试剂 试剂种类 试剂用途 siRNA oligo 与您所要敲除靶基因的转录本（mRNA）完全互补 转染试剂 如脂质体法，lipofectamin2000(invitrogen)，上海吉玛的转染试剂 RNAi-Mate，电穿孔法等 实验对照 包括阴性和阳性及 Mocking control 基因表达的检测方法 如 mRNA 水平检测用 qRT-PCR；蛋白表达水平检测用 western blot D. 上海吉玛 RNAi 相关产品 普通 siRNA Oligo 上海吉玛 siRNA Oligo 是在 ISO9000 质量标准下生产并经过了反复优化和严格测试；产品质量高度稳定，以退火双链 RNA 冻干粉的产品形式提交给用户。 化学修饰 siRNA Oligo 上海吉玛 化学修饰 siRNA Oligo 不仅增强了 siRNA 在血清、体内及细胞培养中的稳定性，同时与标准 siRNA 作用时间相比，上海吉玛 化学修饰 siRNA Oligo 的作用时