低温保存管(cryotube)中之一般菌种临时存放及活化.docVIP

低溫保存管（cryotube）中之一般菌種臨時存放及活化 A. 低溫保存管之臨時存放及解凍 1. 低溫保存管（cryotube）應存放於－20 ~ －80之低溫條件下。 2. 準備 37之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在電氣水浴槽中改放酒精，不可以火加溫，以免危險；若以 37水浴取代，應避免水中微生物污染），其中事先安放小試管架（可放置 cryotube 之大小），液面不可高達管塞。 3. 將 cryotube 從低溫保存條件中取出，置於 37浴槽之小試管架上。 4. 不斷輕微搖動 cryotube，液面不可高至管塞，直至結冰完全溶解（約需 2 分鐘）。 B. 菌株活化: 在無菌操作下 1. 用無菌微量吸管，從已溶解之 cryotube 吸取 50 ?l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固態指定培養基 培養基編號及溫度示於菌株訂購單 某一邊緣附近，以劃線法接種於培養基。 2. 將接種好的培養基置於指定溫度的培養箱中培養。 C. 劃線法 1. 手持金屬接種環，用酒精燈將接種環（共約 5 公分）燒至火紅，並不斷來回燒烤金屬固定桿之前約 10 公分，等待約 10 秒鐘，將接種環前端輕觸培養基邊緣凝膠（無菌體部份），待接種環完全冷卻後，以環沾黏菌滴，由培養基邊緣向中央輕輕橫劃緊接的平行線，直到涵蓋 1/3 培養基為止（I 區）。 2. 灼燒接種環，待數秒冷卻後，旋轉培養基自 I 區塗佈的邊緣再橫劃數條線到未接種的區域（II 區）。 3. 重複 2. 的動作完成 III 區與 IV 區。 4. 灼燒接種環，將接種環歸位。 D. 圖示 （2）平板劃線法