ABCG2基因单核苷酸多态性与闽南地区人群原发性痛风相关性研究.docVIP

ABCG2基因单核苷酸多态性与闽南地区人群原发性痛风相关性研究 　　【摘 要】目的：研究三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2基因（ABCG2）第5外显子单核苷酸多态性C421A位点与中国闽南地区人群原发性痛风发病的相关性，为闽南地区人群痛风的早期诊断筛选合适的遗传标记。方法：采用改进的三引物法对154例痛风患者和160例健康志愿者的外周血样本进行扩增检测，利用统计学分析SNP位点（rs2231142）的基因型携带频率、相对危险度及与闽南地区人群痛风发病相关性。结果：痛风患者AA型携带频率为18.80 %，而正常人群中为8.12 %，痛风患者的AA基因型和A等位基因携带频率明显高于正常人群。P0.01；痛风患者AA型携带频率为43.52 %，而正常人群中为23.44 %，P0.01。rs2231142位点多态性与痛风发病显著相关（F值为31.97，P0.01），AA型携带者与CC基因型相比，发病风险提高了4.397倍，经校正后为4.371倍； A/C杂合型携带者发病风险提高了3.250倍，校正后为2.879倍；A等位携带者发病风险与C等位基因相比提高了2.516倍。另外rs2231142位点的多态性对收缩压、舒张压以及血尿酸、尿尿酸、C?反应蛋白、甘油三脂、尿素氮、肾结石等生化指标检测值有显著影响。结论：ABCG2 基因上单核苷酸多态性位点rs2231142与闽南地区人群痛风发病有很大相关性，可以作为闽南地区人群痛风早期诊断的一个遗传标记。 　　【关键词】 痛风；单核苷酸多态性；rs2231142；三引物法；早期诊断 　　痛风是一种单钠尿酸盐沉积所致的晶体相关性关节病，与嘌呤代谢紊乱及（或）尿酸排泄减少所致高尿酸血症直接相关，属于代谢性风湿病范畴，流行病数据表明，近年来我国人民由于生活水平提高和生活习惯改变，痛风发病率急剧升高，并呈现低龄化趋势[1]。研究表明，遗传因素是痛风发病的一个重要因素，三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2基因（ATP-binding cassette，subfamily G（WHITE），member 2；ABCG2）是一种ATP结合转运蛋白，广泛分布在具有分泌和排泄功能的组织，其功能异常可导致尿酸排泄能力下降[2]。目前认为ABCG2基因上单核苷酸多态性在这一过程中起了重要作用，其中（single nucleotide polymorphism，SNP，rs2231142，）C421A（rs2231142）位点与痛风发病相关性最大，能够解释10 %～29 %的痛风发病[3]。ABCG2基因单核苷酸多态性在闽南地区人群中研究还未见报道，本文采用改进的单引物等位基因特异性扩增方法，不经过基因提取，直接对154例痛风患者和160例健康志愿者的外周血样品进行扩增检测，并分析rs2231142位点基因型与痛风发病相关性，为痛风的预防控制和治疗提供参考。 　　1 实验样本 　　所有的基因组样本均来自福建省泉州市正骨医院痛风患者及健康志愿者，年龄17～78岁，平均（64±14）岁。痛风组154例，为2010年7月至2011年12月福建省泉州市正骨医院门诊和住院的痛风患者，均符合1977年美国风湿病协会制定的痛风性关节炎诊断标准。对照组160例，为2010年7月至2011年12月福建省泉州市正骨医院日常体检等健康志愿者，排除痛风、高尿酸血症、高脂血症、高血压、冠状动脉硬化性心脏病、糖尿病、恶性肿瘤等疾病。 　　2 试验方法 　　2.1 引物设计 本文主要检测人群ABCG2基因rs2231142位点基因型，SNP位点附近的相关基因序列从NCBI获得，引物设计使用Primer 5.0软件，Tm值计算采用网上软件工具OligoAnalyzer 3.0[4]；为增加检测的特异性，引物3′端倒数第3个碱基引入了错配碱基，见表1。 　　2.2 血液样本与基因组的获得与保存 用EDTA（或柠檬酸钠）抗凝管抽取实验对象的外周静脉血5 ml（在知情同意的前提下，获取患者和志愿者的血液样本）置4 ℃保存备用。取200 μl外周血样本，用全血DNA提取试剂盒（Beijing Sunbiotech Co.td）按说明书提取基因DNA，TE缓冲液溶解，并将其浓度调整为50 ng?μl-1，置4 ℃保存备用。 　　2.3 三引物SNP基因型特异性扩增 扩增体积25 ?l，包括1.5 mmol?L-1的MgCl2、0.25 mmol?L-1的dNTPs、1.0 U Taq DNA聚合酶（大连TaKaRa公司生产），0.4 ?mol?L-1的P142FW，0.4 ?mol?L-1的P142RN（每个样品需要两管PCR进行反应，内引物分别为P142RN1和P142RN2）， 2.5 ml10×PCR buffer（50 mm