HPLC法测定外伤如意膏中盐酸小檗碱的含量.docVIP

HPLC法测定外伤如意膏中盐酸小檗碱的含量 　　摘要：目的：为了能够更好的控制外伤如意膏制剂的中盐酸小檗碱的含量，本文就HPLC测定外伤如意膏中盐酸小檗碱的含量进行了浅显的研究和探讨。 　　方法：高效液相色谱法，采用CAPCELL PAK C18 MGⅡ色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸溶液（每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g）为流动相，流速为1 ml/min，柱温为30℃，检测波长为265 nm。 　　结果：当盐酸小檗碱的含量控制在0.0503μg～0.4026μg范围之内时，与峰面积的线性关系最为理想，r=1，平均回收率为98.4%，相对标准偏差值（RSD）=2.2%（n=9）。 　　结论：HPLC法应用于外伤如意膏中盐酸小檗碱含量测定的操作便捷，精准性高，值得推广。 　　关键词：高效液相色谱法 外伤如意膏 盐酸小檗碱 　　【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2014）04-0009-02 　　外伤如意膏由紫草、地榆、栀子、大黄、黄芩、黄柏、冰片等七味中药制成的中药复方制剂，具有清热解毒，凉血散瘀，消肿止痛，止血生肌。用于跌打撞伤，骨折脱臼，筋伤积瘀，皮肉损伤化脓，烫火伤等。为了能够更好的控制如意膏中盐酸小檗碱的含量，保证其临床效果的最大发挥，本文就高效液相色谱法测定外伤如意膏中盐酸小檗碱含量的实际效果进行了测定，现报道如下。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器。Waters高效液相色谱仪，包括Waters2487紫外检测器、Waters2695色谱工作站；本次研究活动中所采用的色谱柱均选择由杭州中拓仪器有限公司生产的CAPCELL PAK C18 MGⅡ色谱柱；密理博Milli-Qcentury纯水柱；SARTORIUS BSA-CW系列（全自动内校）分析天平BSA124S-CW；昆山舒美KQ-300超声波清洗器（外形尺寸（mm）：320×264×320，内槽尺寸（mm）：300×240×150，容量（L）：10，超声频率（KHz）：40，超声功率（W）：300）。 　　1.2 试药。盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检验所，供含量测定用，批号110713-200911，含量86.8%）；外伤如意膏（佛山冯了性药业有限公司提供，批号：UG0001、UF0004、UF0006）；甲醇、盐酸、十二烷基磺酸钠等均为分析纯；HPLC用乙腈为色谱纯；均选用超纯水作为本次研究活动中HPLC用水。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件。色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGⅡ（型号规格：S5 4.6*150/S5 4.6*250）。流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（45∶55）（每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g）；流速：1.0 ml/min；检测波长：265nm；柱温：30℃；进样量：本次研究活动中所使用的对照品溶液为10μl，使用的供试品溶液为10μl。 　　2.2 溶液的制备。 　　2.2.1 在制作对照品溶液时只需取适量的盐酸小檗碱，经过精密的称量后，加入适量的甲醇当中，制成每1毫升中含有56.9微克的溶液即可得出。 　　2.2.2 在制作供试品溶液时，取2-3克样品，经过精密的称量后，加入盐酸-甲醇（1∶100）25ml，称重，加热回流30分钟，放冷，称重，用盐酸-甲醇（1∶100）溶液将失去的重量补足，滤过，取续滤液，即可。 　　2.2.3 阴性对照溶液的制作过程中需要严格按照处方中列出的比例和具体的操作 　　步骤，制作出不含黄柏的阴性对照样品，按照本文中2.2.2一项中的制作方式对阴性对照溶液进行制作即可。 　　2.3 系统适用性试验。分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μl，按“2.1”项下色谱条件进样。结果：供试品及盐酸小檗碱对照品在经过处理后相应的位置上均出现了色谱峰，供试品色谱中的分离度明显优于盐酸小檗碱色谱中的分离度；阴性对照组在相应的部位上并未出现色谱峰，从中，我们不难发现，阴性对照溶液对样品的测定并不具有干扰作用。详细情况将图1。 　　2.4 线性关系考察。精密吸取20.13μg/ml盐酸小檗碱对照品溶液2.5、5.0、10.0、15.0、20.0μl，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标进行线性回归，得回归方程y = 4375x - 631.64（r=1）。结果表明，当盐酸小檗碱的进样量控制在50.3ng～402.6ng范围内时与峰面积呈现的线性关系最为理想。 　　2.5 精密度试验。精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，每次 10μl，测定盐酸小檗碱峰面积。结果RSD为0.2%，表明仪器精密度良好。 　　2.6 稳