生物饵料培养实验指导教学版教程范本.doc

实验一 光合细菌、单胞藻的形态观察及计数 一、实验目的 观察光合细菌和单胞藻的形态，同时掌握用血球计数板法测光合细菌和单细胞藻密度的方法。 二、实验内容 1 观察光合细菌、单胞藻的形态； 2 用血球计数板法测定光合细菌和单细胞藻密度。 三、实验材料 单胞藻，光合细菌 四、实验仪器、设备 光学显微镜，血球计数板，载玻片，血盖片，盖玻片，擦镜纸，纱布，计数器，胶头滴管。 五、试剂 鲁哥氏碘液。 六、实验原理 血球计数板构造 血球计数板是用一块比普通载玻片厚的载玻片特制而成。板的中部有两个被凹沟包围的近方形平面，再向外左右各有一个处于凹沟之中的狭长的长方形平面，前者比后者低0.1mm。在近方形平面的中央划线为一具准确面积的大小方格，在其中可以分为九个大方格，每一大方格的面积是1mm2。在四角及中央的大格又可分为16个中格。在中央的大格每一中格又分为25个小格，共400个格（也有一种计数板是25中格×16小格的，总数也是400格）。当加盖玻片后，每一大格即形成体积为0.1mm3的空间。 血球计数板构造图 七、实验步骤 ㈠ 光合细菌和单胞藻形态观察：取1滴藻液或菌液滴在载玻片上，盖上盖玻片，在显微镜下进行观察其形态。由于光合细菌个体较小，必须在油镜下观察。 ㈡ 计数： 1准备工作 容器准备 定量前先清洗一个容积为30-100ml的容器，例如50ml烧杯取样。由于光合细菌和藻类细胞在培养液中的分布是不均匀的，尤其是具有运动能力的种类更明显。所以在取样前必须进行摇动，摇动后，立即取样。 样品固定 如果样品细胞具有运动能力，必须加1-2滴碘液杀死后才能计数。 样品稀释 如果细胞的浓度太大，计数困难，则必须把样品稀释到适宜的浓度。取已知体积的样品加入到已知体积的过滤海水中，从而达到一定的稀释倍数。例如取1ml藻液，加入到9ml海水中，藻密度就稀释到10倍。如果所测样品细胞具运动能力，可在稀释海水中事先加入鲁哥氏液，从而在稀释的同时完成固定。 2藻密度的测定 取清洁血球计数板，平放在实验台上，然后盖上清洁血盖片。摇动样品瓶，使细胞分布均匀，摇动后，立即用一支干的微吸管吸取藻液，迅速把吸管口放到计数板上的盖玻片边缘处，轻压橡皮头使水样流入计数板内。注意控制水样流入量，不能过多，过多则流到沟内，也不能过少，应充满划线方格及其周边部分，还应该注意不能有气泡，如果不合格，应重做。然后，稍停一分钟，待水样细胞沉降到玻片表面后，在显微镜下计数。 藻类细胞的计数，一般使用低倍镜或中倍镜，可计数任何对角两个大格，把大格中的16个中格逐一计数，每个样品需重复计数2次，然后取其平均值。 按下列公式计算每毫升藻液内所含的藻类细胞数： 1ml水体藻类细胞=计算平均值×10000×藻液稀释倍数 例：取1毫升小球藻藻液，加9毫升过滤海水稀释，在血球计数板上计算一大格的平均值为88个藻细胞 则1毫升藻液中小球藻的细胞数=88*10000*10=8800000 2光合细菌密度的测定： 光合细菌的计数，必须使用油镜才能观察清楚。可计数中央大格的四个角的中格，每个中格有25 个小格，逐一计数。四个中格相加共计数100个小格。计数出菌细胞总数后，按下列公式计算出每毫升菌液的菌细胞数。 每毫升菌液的菌细胞数=计数100个小格的菌细胞数×4×10000×稀释倍数 例如吸取待测的光合细菌菌液1ml，加水19ml稀释，计数100个小格的菌细胞数为320，则每毫升菌液的光和细菌数为： 320×4×10000×20=2.56亿 八、实验报告要求 要求绘出单胞藻和光合细菌的形态图，并测出一种单胞藻和一种光合细菌的密度。单胞藻或光合细菌各取样两次，每个样品测2个重复，取平均值。 九、实验注意事项 1 在计数前要仔细观察细胞形态，避免在计数时将杂质当作细胞，造成数据偏差； 2 不要将菌液或藻液滴到盖片以上。 十、思考题 1 应如何提高测定的准确性？ 2 应如何合理缩短测定时间？ 实验二 单胞藻的培养 一、实验目的 掌握实验室培养单胞藻的各项技能。 二、实验内容 1 海水的消毒； 2 营养盐母液的配制与消毒； 3 培养容器的准备与消毒； 4 营养盐添加与接种； 5 培养日常管理。 三、实验材料 单胞藻，自然海水。 四、实验仪器、设备 高压蒸汽灭菌锅，光照培养箱，电子天平，电炉，三角烧瓶，细口瓶，移液管，吸球，皮筋，报纸。 五、试剂 NaNO3，NaH2PO4，ZnSO4，MnCl2，CuSO4，FeC6H5O7，Na2MoO4，CoCl2，Na2EDTA，维生素B1，维生素B12。 六、实验原理 本实验综合运用微生物学知识，特别是消毒和无菌操作的理论和技术要领，以及单胞藻营养需求和生态学有关知识，在排除或抑制其他微小生物的前提下将单种单胞藻