鸡精对蟾蜍蝌蚪生长发育的影响要点分析.doc

鸡精对蟾蜍蝌蚪生长发育的影响 冯彩平、王改芳，魏健 （吕梁学院生命科学系，山西吕梁 033000） 摘 要：为了研究鸡精的安全性，本实验采用处于变态前幼体阶段的蟾蜍蝌蚪，每组12只，放入质量浓度分别为0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L、0.32 g/L的鸡精培养液中进行饲养。通过7天的体长体重的测量以及对变态发育情况的观察，在培养液浓度为0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L时，鸡精对蝌蚪的生长发育并无明显影响；当培养液浓度为0.32 g/L时，蝌蚪只有尾长出现了明显变化，总核异常率略有增高，此时鸡精对蝌蚪的生长发育出现了一定的影响。结果表明使用小剂量的鸡精变态前幼体阶段的蟾蜍蝌蚪影响不大。大剂量的鸡精对生物体是否安全还有待进一步的研究。 关键词：鸡精；蟾蜍蝌蚪；生长发育 鸡精是一种复合调味料，在烹调菜肴时适量使用，能促进食欲 1.1 实验动物 实验的开始时间是2015年4月末，笔者于山西省吕梁学院新校区的湖中进行捕捞。待湖内蟾蜍蝌蚪处于变态前幼体阶段时，挑选体色正常、反应迅速、体质健康、大小一致的健康蝌蚪进行实验。所有蝌蚪均在经过曝气处理的自来水中饲养，定时喂食适量饲料(白面馒头碎屑)，同时观察蝌蚪的适应状况。蝌蚪在实验室内饲养1周之后方可用于实验。 1.2 实验器材 胶头滴管、烧杯(1000 mL,100 mL,10 mL)、量筒(1000 mL)、移液管(10 mL)、玻璃棒、药匙、称量纸、吸水纸、塑料杯(高约15 cm、半径约3 cm)、蒸馏水、剪刀、一次性手套、镊子、毛细吸管、NaCl、Na2SO4、HgCl2、解剖刀、解剖针、血细胞计数板、盖玻片、电子天平、光学显微镜、擦镜纸等。 鸡精(太太乐鸡精调味料100 g装)，成分：味精、食用盐、大米、白砂糖、鸡肉、食品添加剂(5′-呈味核苷酸二钠、核黄素)、鸡蛋全蛋液、食用香精、咖喱粉、小葱、大蒜。 表1-1 包装袋上注明的营养成分表 项目 每份 营养素参考值% 能量值 47千焦(kJ) 1% 蛋白质 1.1克(g) 2% 脂肪 0.2克(g) 0% 碳水化合物 1.2克(g) 0% 钠 1000毫克(mg) 50% 注：每份为5克(g) 红细胞稀释液(Hayem稀释液)的配制：取NaCl(维持细胞渗透压)0.5 g，Na2SO4(使溶液的密度增加，使红细胞分布均匀并且不易下沉)2.5 g，HgCl2(固定红细胞，防腐)0.25 g，加入蒸馏水至100 ml，搅拌均匀。 2 方法 2.1 预实验 预先设置鸡精的质量浓度为0.10 g/L、0.20 g/L、0.40 g/L、0.60 g/L的培养液， 根据预实结果，分别设置1个对照组和4个不同浓度梯度的培养组，每组溶液均为500 mL，对照组的培养液为曝气后的自来水，其余4组配制的培养液中的鸡精的质量浓度分别为0.08 g/L、0.16 g/L、0.24 g/L、0.32 g/L。 2.3 观察测定 选取体长与体重差异不显著的蝌蚪，在每组培养液放入12只进行饲养。每天记录蝌蚪的体长体重及变态发育状况，共观测7天。 2.4 蝌蚪红细胞的检测与计数 在实验的第7天，每组记录完体长体重数据之后，进行红细胞微核实验。每组取5只蝌蚪，用纱布将其体表擦干，在头部和尾部连接处用剪刀剪断并置于烧杯中，然后用玻璃棒捣碎，之后向烧杯中加入少量的红细胞稀释液，接着用玻璃棒搅拌均匀，静置15 min，最后使用双层纱布对烧杯里的的混合液体进行过滤，获得的滤液即为实验所需的血细胞溶液。 将盖玻片（与计数板同时配套购置）放入计数板中央，用洁净玻璃棒蘸取少量已稀释混匀后的血细胞悬浮液，于盖玻片边缘一次性滴入计数室内，使之灌满，多余的液体用滤纸吸掉，静置2~3 min后，待细胞下沉后进行计数[1]。将制作好的装片使用光学显微镜进行观察，先在10倍镜下调整找到要观察的计数室，之后转到40倍镜，调整好视野，观察计数室内的蝌蚪的红细胞，记录红细胞的形态和核异常的情况。观察时需要用到软件DigiLabII-Client进行拍照，之后统计红细胞异常的类型及数目。 2.5 数据通信统计与分析 将之前观察到的细胞数据进行整理分析，计算出蟾蜍蝌蚪的红细胞数、微核细胞数和核异常细胞数。公式如下： 红细胞数 = 5个中方格所数得的红细胞的个数 × 5 × 10 000 × 稀释倍数 微核细胞率(‰) = 含有微核的细胞数/实验观察到的红细胞总数 × 1 000‰ 核异常细胞率(‰) = 出现核异常(除去微核)的细胞总数/实验观察到的红细胞总数 × 1 000‰ 总核异常率 = 微核细胞率 + 核异常细胞率 在将实验得到的数据进行统计并计算结果后，采取片方检验的方法对数据进行进一步的处理，最后一步对处理所得的数