离子交换树脂分离混合氨基酸.doc

离子交换树脂分离混合氨基酸实验目的1. 了解离子交换树脂的工作原理及操作技术。 2. 掌握离子交换法的操作技术 实验原理离子交换树脂是一种合成的高聚物，不溶于水，能吸水膨胀。高聚物分子由能电离的性基团及非极性的树脂组成。极性基团上的离子能与溶液中的离子起交换作用，而非极性的树脂本身物性不变。通常离子交换树脂按所带的基团分为强酸、弱酸、强碱和弱碱。 离子交换树脂分离小分子物质如氨基酸、腺苷、腺苷酸等是比较理想的。但对生物大于物质如蛋白质是不适当的，因为它们不能扩散到树脂的链状结构中。故如分离生物大子、可选用以多糖聚合物如纤维素、葡聚糖为载体的离子交换剂。 本实验用磺酸阳离子交换树脂分离酸性氨基酸 天冬氨酸 、中性氨基酸 丙氨酸 碱性氨基酸 赖氨酸 的混合液。在特定的pH条件下，它们解离程度不同，通过改变脱液的pH或离子强度可分别分离。天冬氨酸（Asp）2.77 , 赖氨酸（Lys）9.74 实验材料1．实验器材 732阳离子交换树脂 磁力搅拌器、 烘箱：1个调至80℃，公用。 毛细管：若干。 培养皿： 烧杯 层析滤纸（定性）：直径15cm，每人一张。 直尺、铅笔、电吹风：自备。 喷雾器：34个，公用。2．实验试剂 1mol／L HCl 1mol／L NaOH 0.1mol／L HCl 0.1mol／L NaOH 醋酸缓冲液：水150ml，无水醋酸钠82克，无水醋酸25ml，加水定容250ml （pH 5.5）。 标准氨基酸溶液：天冬氨酸、赖氨酸均配制成2mg/mL的0.1mol/L的盐酸溶液（pH 1）。 混合氨基酸溶液：将2种标准氨基酸溶液按1∶2.5的比例混合，、每个小组需要50mL。 扩展剂：将4体积正丁醇和1体积冰醋酸放入分液漏斗中， 与5体积水混合，充分振荡，静置后分层，弃去下层水层。 显色剂：0. 25%水合茚三酮正丁醇溶液。 实验方法1.732树脂的处理（全班统一处理） 将干树脂用蒸馏水浸泡过夜，使之充分溶胀 倾去清液。再用8-10倍体积1mol/L的氢氧化钠浸泡4小时，倾去清液，洗至中性。用8-10倍体积的1mol/L的盐酸浸泡小时，倾去清液，洗至中性。最后用0.1mol／L HCl盐酸浸泡小时，倾去清液。2.吸附（每组处理一个）将原料液体积与732离子交换树脂以5：1的比例装在三角瓶中，搅拌至吸附平衡，搅拌h，过滤，弃去溶液。 3.第一次洗脱（每组处理一个） 取树脂，加入3倍体积的醋酸缓冲液，搅拌h，过滤，收集滤液及树脂。 4.第二次洗脱（每组处理一个）取树脂，加入3倍体积的0.1mol／L NaOH洗脱液，搅拌h，过滤，收集滤液及及树脂5氨基酸鉴定（每人都要做） （1）滤纸的准备： 取一长方形滤纸 9cm×8cm ，在滤纸纵向对应的两边距边沿1.5cm处，各画两条平行线，一条作前沿标志，一条作点样线，在点线上每隔1cm画一个“+”作为点样位置，共5个点。 （2）点样： 用毛细管点样，中间的点混合氨基酸，左侧点两种标准氨基酸，右侧分别点第一次和第二次洗脱的溶液；每点一次用电吹风吹干后再点下次（此时，用冷风吹干，防止氨基酸变性降解），点样点的直径应控制在2mm左右，点样完毕用大头针将滤纸做成筒形，点样面向外,注意纸的两边不要接触。（3）展层： 向培养皿中加入层析溶剂，液层不要超过点样线，（高约1.5cm）将滤纸点样点朝下放入层析溶剂中，将培养皿上盖一烧杯密闭，待溶剂到达标志线后取出，冷风吹干。（4）显色： 用喷雾器将0.25％茚三酮显色剂均匀喷在滤纸上，热风（加快反应）反应吹干显色。 （）计算 显色完毕测量洗脱液的Rf值，并判断洗脱液中都有哪中氨基酸，各人将自己的实验结果贴在实验报告上。 思考题1、做好本实验的关键是什么？ 2、为什么两种氨基酸在不同的洗脱液中洗脱？