药物体外对肿瘤细胞的作用.docVIP

药物体外对肿瘤细胞生长抑制作用 姓名：王英迪 学号专业年级：2013级药学 上课时间：2016.5.12 实验目的 1、学习无菌操作技术、细胞计数方法。 2、学习MTT实验方法。 3、观察抗肿瘤药物体外对肿瘤细胞生长的抑制作用。 4、了解抗肿瘤药物体外筛选方法。 实验材料 细胞株： K562 （人红白血病细胞） 药品及试剂： 5- 氟尿嘧啶（5-FU ），MTT ，1640 培养基 ，胎牛血清，台盼蓝染色 液 器材： 超净工作台、倒置相差显微镜、 96 孔细胞培养板、微量移液器、铝制 饭盒、灭菌枪头、枪头盒、细胞计数板、盖玻片 实验方法 （一）细胞计数法： 1）取酒精棉球清洁计数板和专用盖玻片，并用丝绸布或擦镜纸轻轻拭干。 2）用胰酶消化分散贴壁细胞或直接收集悬浮细胞制成均匀分散的单细胞悬液，必要时应进行适当的稀释或浓缩。 3）取细胞悬液与台盼蓝1:1混匀，染色3分钟，取20μl液体，沿计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液。加样量以充满不外溢为宜，也不要过少或出现气泡。 4）计算细胞活力（%）=（活细胞数/细胞总数）×100% （二）药物体外对肿瘤细胞的影响（MTT法） 1.接种细胞：收获对数生长期细胞，吹打成单细胞悬液，调整至合适浓度；接种入96 孔板中，每孔