核酸的性质教程范本.pptVIP

核酸的凝胶电泳 通过凝胶电泳 可进行核酸分离 知道核酸的纯度 测定分子大小 估计核酸的构象 凝胶电泳兼有分子筛效应和电荷效应 琼脂糖凝胶电泳（agarose gel electrophoresis） 适用于大分子核酸，一般用于DNA分析 琼脂糖凝胶电泳的迁移率主要与分子大小、胶浓度、核酸构象、电压等有关 泳动速度：环状DNA 线状DNA开环DNA 聚丙烯酰胺凝胶电泳 （polyacrylamide gel electrophoresis） 用于分析RNA或小于1000bp的DNA片段 电泳后，用EB（溴乙锭）染色，紫外线下可见条带 DNA的核苷酸序列测定 DNA的测序策略 DNA片断的序列测定 英国Sanger ， 1975年加减法，1977年末端终止法，目前广泛用于DNA的自动测序 美国Maxam和Gilbert ， 1977年化学断裂法 基本原理：把DNA变成在不同碱基的核苷酸处打断的四套末端标记的DNA片断，当相应于四个不同碱基产生的四套DNA片断并排进行电泳分离时，产生一个可以直接读出DNA顺序的区带。 酶法（双脱氧法、末端终止法） 酶反应体系中含 单链模板（待测序DNA） 引物（一段寡核苷酸，与模板互补形成双链） 底物（四种dNTP） DNA聚合酶（将dNTP按互补原则加在引物的3’端，延伸方向5’向3’ ） 分成四个反应管 每个反应管含四种底物dNTP，其中一种带上