核酸分子杂交与应用教程范本.ppt

探针的种类 DNA探针：双链或单链DNA探针是最常用的核酸探针。长度在几百碱基对以上。DNA探针又分为： 基因组DNA探针：有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和人类细胞DNA探针，多为某一基因的全部或部分序列，或某一非编码序列。 cDNA探针：以mRNA为模板经过逆转录酶催化产生的互补于mRNA的DNA链。 探针的种类 DNA探针优点： 1、一般克隆在质粒载体中，可以无限繁殖； 2、DNA探针不易降解 3、DNA的标记方法比较成熟。 探针的种类 RNA探针：可以是标记分离的RNA，也可以是重组质粒在RNA聚合酶作用下的转录产物。其优点是： RNA探针为单链，复杂性低，与靶序列杂交反应效率极高 因不存在重复序列，因此特异性高 本底低 缺点： 探针的种类 寡核苷酸(oligo)探针：由17～50mer组成的短探针。 优点： 可根据需要人工合成相应的序列； 因片段短，只有一个核苷酸突变，其Tm值也有明显变化，特别适用于点突变的检测 杂交速度快特异性强 缺点：所带标记物少灵敏度低；片段短杂交体不稳定 探针的标记 切口平移法 标记原理：是目前实验室是最常用的一种脱氧核糖核酸探针标记法。利用大肠杆菌DNA聚合酶1的多种酶促活性将标记的dNTP掺入新合成DNA链中使探针被标记。 带缺口(nick)的线状、超螺旋及环状双链DNA均可作为切口平移法的模板。 标记步骤 1、取1μgDNA溶于少量无