生物电子传感器试卷.ppt

Application of Real-Time Cell Electronic Sensing (RT-CES) Technology to Cell-Based Assays 将实时细胞电子传感技术(RT-CES)应用到细胞检测中 李雪莹 介绍 材料和方法 RT-CES系统 细胞培养 实验材料 数据分析 结果和讨论 RT-CES的原理 细胞增长率的测量 LTK细胞的 毒性和保护作用 细胞有丝分裂抑制因素的实验 A2780细胞凋亡的感应 总结 Introduction 随着基因组学和蛋白质组学的快速发展，人们找到了更多的基因靶点以用于药物治疗，这导致了对新型药物需求的快速增长。这就需要一种可以快速高效地找到治疗靶点对应化合物的检测方法。包含对信号分析、通路分析、离子通道分析、细胞成像分析的细胞功能性检测已经成为寻找新型药物的首选。 普通的筛选细胞实验用示踪物（放射性同位素、光吸收、荧光、冷光标记等）来检测多种细胞功能，但这种方法不仅费时，还增加了实验复杂程度，干扰性也增加。近几年兴起的无标记检测技术（应用比色共振反射来直接测量细胞相互作用；测量细胞光、声方面的移动性来进行optophoresis 细胞分析；基于细胞基质阻抗测量 的电子测量）。 比色共振反射：普通荧光分光光度仪研究卟啉在核酸分子上的J型堆积时会产生的增强的光散射信号 。 optophoresis 细胞分析：optophoresis是一种非侵入性的细胞分析技术是基于活全细胞与光学梯度域的相互作用，通常产生的近红外激光。 无标记检测的潜在好处在于同一的实验条件、无创伤性测试且实时收集信息量大、外部条件干扰少。先介绍electrical cell–substrate impedance sensing电子细胞基质阻抗传感(ECIS) 。 传统的ECIS系统中，一个大面积参考电极和一个或多个小的检测电极(小于0.1%底面积)固定在细胞培养皿底部。通过测量参考和检测电极之间的阻抗的变化可以实时监控细胞的粘附、分离、扩散、微移动。虽然这样有很多优点，但它也有一些缺点： 只有一小部分细胞在监控范围，很多细胞的变化都检测不到。 ECIS系统只有八个检测培养皿孔却有很大面积的参考电极，这对未来规模化发展不利。 下面要介绍一种real time cell electronic sensing (RT-CES) 实时细胞电子传感技术，它用于观测细胞增殖、毒性、成长抑制、凋亡等生物实验。因为新型电极设计，它几乎可以观察培养皿孔中全部细胞的动态，让实验结果更加具有一致性和可重复性。 和传统实验结果相比，两者几乎相同，但RT-CES展示了细胞在药物作用下的动态变化，还可以一次性进行更加细致的实验。 Materials and Methods 三大构成：电子传感器分析仪，装备站，16孔培养皿板 circle-on-line电极排列 玻璃面的处理增加细胞在培养皿孔上的粘附强度 培养皿板在装备站上，装备站通过电线连接电子传感分析仪，在RT-CES软件的操作下记录和处理实验数据。 16孔培养皿板的底部微电极阵列。每个检测区域的面积是19.6平方毫米检测区域的直径是5毫米,外部用于测量阻抗的电子传感器分析仪电极用的是10-mV交流电压。 左边是裸电极等效电路，包括电解质电阻溶液的电阻和溶液/电极界面的阻抗。 右边是细胞粘附后的电极等效电路，细胞等效为电容和电阻的并联。 所有细胞：湿润的保温箱，37°C, 5% CO2，10%胎儿牛血清，100 g/ml盘尼西宁/100 units/ml链霉素 U2OS人骨肉瘤细胞：McCoy媒介加左旋谷酰胺 A2780人卵巢癌细胞：RPMI加10 g/ml胰岛素 LTK鼠成纤维细胞：2 mM谷氨酸盐，1 mg/ml G418（抗生素），10 nM地塞米松（抗炎药），地塞米松受体的抑制剂 细胞先在室温下培养15分钟再放入RT-CES恒温箱 微孔板荧光检测仪 组织培养皿 盐酸阿霉素 紫杉醇 用Prism软件（GraphPad Prism 是一数据分析和作图软件, 带有基本的生物数理统计, 曲线拟合, 及图表显示等功能, 适用于生物数理统计实验的数据处理 ）进行数据的非线性回归分析。 Results and Discussion