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紫外分光光度法测定维生素B1片 含量以及方法验证研究报告 四川大学华西药学院 周鹏翔 2012141661009 2015年5月10日紫外分光光度法测定维生素B1片含量以及方法验证 周鹏翔 （四川大学华西药学院 成都 610000） 摘要： 目的：采用紫外分光光度法测定维生素B1片中维生素B1的含量并对该方法进行验证。 方法：用紫外-可见分光光度法在246nm处测定吸光度，并用百分吸收系数法、对照品比较法和工作曲线法计算含量；用5个梯度浓度的维生素B1验证线性和范围，用回收率表示准确度，用空白辅料溶液验证专属性。 结果：在本实验条件下，用紫外分光光度法测定维生素B1含量的方法专属性不高；当维生素B1浓度在7.5μg/ml至17.5μg/ml范围内线性关系良好，线性回归方程为：y = 0.0387x - 0.0013，R2=0.9993；平均回收率为97.49%，RSD(%)为0.79%；吸收系数法测得平均标示量为89.28%（n=3））） 关键词：紫外分光光度法 维生素B1 含量测定 方法学验证 维生素B1（Vitamin B1）,为白色结晶或结晶性粉末,主要由嘧啶环和噻唑环结合而成。在酸性溶液中很稳定,在碱性溶液中易被氧化,使分解变质。故应置于遮光、凉处保存,且不宜久贮,具有保护神经系统的作用[1]。 近年来对维生素Ｂ１测定方法的报道较多，如高效液相色谱法、流动注射化学发光法、多元线性分光光度法、荧光分光光度法、毛细管电泳电化学法、氧瓶燃烧电位滴定法等。这些方法操作麻烦、时间较长[2]。紫外分光光度法仪器较便宜，普及度高且方法的操作较简便，故本实验以《现代药学实验教程》中药物分析实验十九为基础，选用紫外分光光度法测定维生素Ｂ１含量并对该测定方法进行验证。 1 仪器与试药 实验仪器：UV-2102c型紫外可见分光光度仪（编号、BP210S电子天平、100ml容量瓶、干燥锥形瓶、干燥漏斗、5ml移液管、10ml滴定管、烧杯、滤纸、胶头滴管、石英比色皿。 实验试药：维生素B1片（规格10mg×100片，生产批国药准字华中药业股份有限公司）、盐酸溶液（9→1000）、维生素B1空白辅料、维生素B1储备液0.2500mg/ml、维生素B1储备液0.5000mg/ml、蒸馏水。 2 实验原理 测定维生素B1片含量的传统方法有紫外可见分光光度计、HPLC法、分光光度法等。ChP2010收载有维生素B1及其片剂和注射液。 维生素B1是由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季铵类化合物，噻唑环上季铵及嘧啶环上氨基，为两个碱性基团，可与酸成盐。维生素B1分子中具有共轭双键结构，在紫外区有吸收峰，并且维生素B1的紫外吸收峰随溶液pH的变化而不同，pH=2（0.1mol/L）时，最大吸收波长在246nm处，吸收系数为421，根据其最大吸收波长处的吸光度，则可以计算维生素B1含量。ChP2010收载的维生素B1片剂和注射液均采用本法测定。 维生素B1(又称硫酸硫胺)，化学名称为：氯化4-甲基-3[(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)甲基]-5-（2-羟基乙基0噻唑鎓盐酸盐。结构式如下： 3 方法与结果 3.1 处方分析 由处方分析可知，主药维生素B1含16.39%，辅料含83.61%，规格为10mg×100片。若精密称取相当于维生素B125mg的片粉，则取10片维生素B1片，测得总重为0.6155g，平均片重为0.06155g，故待测样品需称重0.1539g，处方成分见表1。 表1 维生素B1处方表 成分 含量(g) 比例（%） 维生素B1 10 16.39 淀粉 20 32.78 糊精 30 49.18 硬脂酸镁 1 1.639 3.2 测定波长的选择及比色皿配对 维生素B1在pH7时的吸收光谱上有两个吸收峰：232-233nm、266nm；在pH时吸收峰为246nm。维生素B1在246nm的吸收峰干扰因素较少，吸收又最强，《中国药典》（2005年版）规定以246nm处吸收峰的百分吸收系数（421）为计算含量依据[3]。本实验采用于246nm±2nm（即244nm、245nm、246nm、247nm、248nm）波长分别测定某一待测溶液的吸光度，所测结果表示246nm、247nm及248nm的吸光度均为0.288，为遵循中国药典相关规定，故采用246nm波长测定吸光度，见表2。 选取两石英比色皿进行配对，在相同环境下于246nm处测定吸光度，两比色皿吸光度差值A差为0.003，符合吸光度差值不得大于0.005的要求，故选用此对石英比色皿。 表2 最大吸收波长测定结果 测定编