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外文翻译 RNAi沉默肌肉生长抑制素基因致斑马鱼表型巨大化 Jannel Acosta 1，Yamila Carpio 1，Ingrid Borroto，Osmany Gonz′alez，Mario Pablo Estrada ? 水产养殖生物技术项目，动物生物技术部门，遗传工程和生物技术中心， 邮政信箱：6162，哈瓦那10600，古巴 2004年12月23日收到；修订后的形式2005年4月15日在收到 摘要：肌肉生长抑制素是转化生长因子-β（TGF-β）家族的成员之一，是骨骼肌生长和发育的一个负调节因子。最近，据报导，表达肌肉生长抑制素前体蛋白的转基因斑马鱼骨骼肌的纤维增加。其它新的研究结果表明，除了抑制增殖及分化，肌肉生长抑制素在肌细胞生成中也扮演着一个重要角色。我们已经研究了斑马鱼双链RNA(dsRNA)抑制肌肉生长抑制素功能的能力。通过显微注射罗非鱼对应于生物活性C-端结构域，从肌肉生长抑制素蛋白第268个胺基酸的密码子到端密码子的dsRNA，使实验鱼体重增加。在早期的发育阶段注入dsRNA，可使斑马鱼肌肉发生增生或肥大。此外，干扰基因的影响表现出很强的dsRNA量的依赖性。 关键词：斑马鱼，肌肉生长抑制素，核糖核酸干扰，基因沉默，肥大，增生 1．介绍 肌肉生长抑制素(MSTN)是转化生长因子-β（TGF-β）的成员之一，它对一些哺乳动物物种的骨骼肌生长起着关键的负调节作用。 携带MSTN自然突变基因的“双肌”品种的牛比标准品种有更多的肌肉(Lee和McPherron，1997年；Kambadur等人，1997年；Grobet等人，1997年，1998年)。敲除MSTN基因的小鼠骨骼肌肉急剧增加，并最终导致其增生和肥大(McPherron等人，1997年)。2001年，Lee和McPherron的报告指出，转基因小鼠表达MSTN的原结构域，卵泡抑素或启动素受体IIB型(ActRIIB)在肌肉细胞中显负性，增强肌肉的生长，各方面都类似于被敲除MSTN基因的小鼠。此外，由于MSTN的抑制，转基因鱼MSTN表达原结构域，虽然小但是纤维数量明显大增（Xu等人，2003年）。 许多物种已经发现了MSTN基因，包括一些鱼类(Rodger和Weber，2001年；Rodger等人，2001年；Maccatrozzo等人，2001年a，b；Roberts和Goetz，2001年；Ostbye等人，2001年；Rescan 等人，2001年；Radaelli等人，2003年)，在肌肉、眼睛、鳃丝、脾脏、卵巢、肠道、大脑和中枢神经、睾丸中发现了MSTN的mRNA（Rodger等人，2001年；Maccatrozzo等人，2001年a）。而哺乳动物的MSTN表达主要发生在骨骼肌，这形成了鲜明的对比的。这可以表明，MSTN在鱼身上的功能比在哺乳类动物中的可能会更加多样化。 对于各种动物模型的不同的方法已被用于直接操纵基因在体内的表达。通过同源重组在小鼠中已经创建了特定的基因突变。但是，这个过程是昂贵和费时的，而且不适用于其它脊椎动物物种。最近人们发现，双链RNA（dsRNA）对于秀丽隐杆线虫的基因活动是一个有效的特异性抑制剂（Fire等，1998年），其它物种类似的结果也有被报导，包括果蝇（Kennerdell和Carthew，1998年），涡虫（Sanchez Alvarado和Newmark，1999年），鼠（Wianny 和Zernicka-Goetz，2000年），和斑马鱼（Wargelius等人，1999年；Li等人，2000年）。这个双链RNA的效果，称为RNA干扰或RNAi，在转录之后，有针对性地降解内源性mRNA（Montgomery 和Fire，1998年)。植物的实验证据表明，双链RNA在基因调控和抗病毒过程中可能有更普遍的作用，而在脊椎动物系统中双链RNA已经被证明，能诱导一个全球性的抗病毒反应，导致翻译的停止和RNA的降解（Montgomery 等人，1998年；Sharp，1999年）。 在本次研究中，我们考察了将MSTN的dsRNA注入斑马鱼胚胎后的影响。实验表明，dsRNA的治疗，诱导机体肌肉增生或肥大，使体重增加，且呈剂量依赖性。 2．材料与方法 2.1．向斑马鱼胚胎微量注射合成的dsRNA 通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR），从罗非鱼肌肉产生MSTN的RNA得到互补基因，长333 bp（从核苷酸数目802到终止密码子）。上游引物的序列是5’ CGGAGAGACTCGGGCCTGGAC-3’，下游引物是5’ TGAGCAGCCGCAGCGGTCTACTACC-3’。RNA混合，并将混合物在100℃保温1分钟，在室温下放置3-4小时，制作dsRNA。经退火的RNA（dsRNA）的溶液加入RN