专题1《基因工程》复习技巧.pptVIP

复习的主要内容 1、基因工程的工具 2、基因工程的基本程序 三、基因操作的工具 基因的剪刀（分子手术刀） ——限制性核酸内切酶（限制酶） 基因的针线（分子缝合针） ——DNA连接酶 ?基因的运输工具（分子运输车） ——运载体??? 1、限制酶???  ①分布：主要在原核生物中。 ②作用特点:专一性，识别特定核苷酸序列，切割特定切点。 ? ③识别的核苷酸序列： ④结果：产生黏性未端和平末端 ?举例：EcoR1限制酶、Sma1限制酶??? 2、DNA连接酶???  ①连接的部位：磷酸和脱氧核糖之间的键： 磷酸二酯键（梯子的扶手） ③分类：E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 ?? 3、运载体???  ①作用：将外源基因送入受体细胞。 ②具备的条件： 能在宿主细胞内复制 ，并稳定地保存。??????????????具有多个限制酶切点。??????????????具有某些标记基因 ③举例：质粒、噬菌体 和动植物病毒。??? 基因组文库的构建模式图 cDNA合成过程 第一步，反转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA单链，形成RNA-DNA杂交分子。 第二步，核酸酶H使RNA-DNA杂交分子中的RNA链降解，使之变成单链的DNA。 第三步，以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子。 利用PCR技术扩增目的基因 表达载体需由哪几部分组成 复制原点 启动子 目的基因 终止子 标记基因 第三步：将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入植物细胞 将目的基因导入动物细胞 将目的基因导入微生物细胞 将目的基因导入受体细胞（植物细胞） 将目的基因导入受体细胞（动物细胞） 显微注射法 将目的基因导入受体细胞（微生物细胞） Ca2+处理 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 * 专题1《基因工程》复习 基因工程 基本工具 操作程序 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 运载体 分类及区别 作用 常用载体：质粒：特点 载体条件 其他载体 目的基因的获取 从基因文库中获取 人工合成 利用PCR技术扩增 基因组文库 cDNA文库 原理 条件 过程 基因表达载体的构建 目的 组成及作用 目的基因导入受体细胞 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 主要：农杆菌转化法 显微注射技术 Ca2+处理 目的基因的检测与鉴定 分子水平的检测 个体生物水平的鉴定 应用 转基因植物 转基因动物 基因工程药物 基因治疗 抗虫转基因植物 抗病转基因植物 抗逆转基因植物 改良植物品质 提高动物生长速度 改善畜产品质量 生产药物 做器官移植供体 基因诊断 蛋白质工程 概念 原理 应用 来源 特点 识别核苷酸序列 结果 II II II I 标记基因、目的基因、T-DNA、Ti-质粒、启动子、终止子、限制酶、DNA连接酶、逆转录酶、基因文库、基因组文库、 cDNA文库、PCR技术、热稳定DNA聚合酶、引物、转化、农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、显微注射技术、感受态细胞、DNA分子杂交技术、（基因）探针、杂交带、抗原-抗体杂交 基因工程技术的专有技术名词 逆转录酶 解旋酶 RNA聚合酶 DNA 聚合酶 限制酶 DNA 连接酶 参与的生理过程 作用 名称 连接两个DNA片段，是通过磷酸二酯键连接双链DNA的缺口 基因工程 识别某种特定的脱氧核苷酸序列，并在特定的切点切割 基因工程 DNA复制、PCR技术 在脱氧核苷酸链上添加单个脱氧核苷酸 转录 DNA复制及转录 使碱基间氢键断裂形成单脱氧核苷酸链 注意：使DNA解成两条长链的方法除用解旋酶以外，在适当的高温（如94℃）可使DNA解旋。 逆转录，基因工程 以RNA为模板合成DNA 在核糖核苷酸链上添加 单个核糖核苷酸 ▲“黏性末端”和“平末端” 当限制酶在它识别序列的中心轴线的两侧将DNA的两条链分别切开时，产生的是黏性末端. 而当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生