专题2微生物的培养与应用2土壤中尿素的细菌的分离与计数(一)技巧.ppt

尿素分子的立体结构 1、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 2、课题目的 一、从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 二、统计每克土壤样品中尿素细菌的数目 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 ㈠. 筛选菌株 PCR技术是一种常用的DNA扩增技术，此项技术的自动化，需要使用耐高温的DNA聚合酶，如果请你来找这种耐高温的酶，你会去哪里找？ 热泉70-80摄氏度的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而耐热的Taq细菌脱颖而出。 水生耐高温细菌Taq 1、实验室微生物的筛选原理（P21） 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 （一）筛选菌株 2、选择培养基 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。 （一）筛选菌株 加入青霉素的培养基 ——细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长 不加含碳有机物的无碳培养基 ——分离自养型微生物 1.在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是是什么物质？ 碳源是葡萄糖，氮源是尿素 2.分析该配方的培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，又是如何进行选择的？ 有筛选作用。尿素是培养基中的唯一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。 阅读22页本课题使用的培养基配方 二、统计菌落数目 显微镜直接计数法 稀释涂布平板法（活菌计数法） （二）微生物计数 1、显微镜直接计数法 1mm 每一个大方格边长为 1mm ，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。　　 1mm 下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数是多少? 1ml菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3）　　 5AB×104 5A 缺点： 不能区分死菌与活菌 2、统计菌落数目——稀释涂布平板法 （二）微生物计数 平板菌落数统计注意事项 1、几个菌落粘连一起，只要肉眼能区分，就算几个； 2、不管菌落大小，只要肉眼看得见，就应该计数； 3、菌落数目过多时，可以合理采用样方法。 某班级菌落数统计表格 第1组 第2组 第3组 第4组 1 512 165 190 95 2 568 207 177 162 3 572 178 188 1024 平均 每mL样品中活菌数 平板 组别 恰当的稀释度、正确的涂布操作是成功地统计菌落数目的关键。 （取样0.1mL,稀释倍数106） 【例1】某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL） A.2.34×108　　　　　　B.2.34×109 C.234　　　　　　　　　D.23.4 思考1：如何根据平板上的菌落数推测出每mL样品中的菌株数？ 【解析】选B。稀释倍数为106，0.1 mL稀释液的菌落数的平均值为234，则每毫升样品中菌落数就为234/0.1×106= 2.34×109。 每mL样品中的菌株数=（C÷V）×M C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积 M：稀释倍数 思考2：为什么测平板上的菌落数可以推测样品中的活菌的数目？ 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少活菌。 为了保证结果准确，一般选用菌落数在30~300的平板进行计数。 思考3：统计的菌落数往往比活菌的实际数目高还是低，为什么？ 低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。 第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因 此结果不具有说服力。 第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在 操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平 板的计数值用来求平均值。 实例分析1 启 示 在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。 在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 实例分析2 想一想：A同学和其他同学所得实验结果差异 如此之大，请分析原因可能有哪些？ ① ② 实例分析2 想一想：你能通过设置对照，帮