PCR技术及其应用浅析.ppt

靶序列 靶序列 Primer 1 Primer 2 Biotin Biotin 5’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ Taq DNA Polymerase 引物设计的原则 ①引物长度： 15-30 bp，常用为20 mer左右 ②引物扩增跨度：以500 bp为宜 ③引物碱基：G+C含量以40-60 %为宜 ④避免引物内部出现二级结构 ⑤引物 3′端的碱基一定要与模板DNA配对 ⑥引物的特异性 Primer premier5.0 oligo 6.0软件 酶（Taq DNA polymerase） PCR发明初期所用的DNA聚合酶为大肠肝菌DNA聚合酶I 的Klenow片段。由于该酶不耐热，因此，每次DNA变性后都要重新加入Klenow酶。使这一过程耗时，费力，且易出错。 耐热DNA聚合酶的应用使上述问题得以解决， PCR能高效率的进行，并使PCR反应的自动化成为可能。 目前有两种 TaqDNA 聚合酶供应 天然酶：从栖热水生杆菌中提纯 基因工程酶：大肠菌合成 dNTP 的质量与浓度 dNTP溶液具有较强的酸性，使用时应以NaOH将pH调至7.0～7.5。在PCR反应中， dNTP浓度应在20～200umol/L。 dNTP的浓度过高可加快反应速度，同时也增加碱基的错配率和实验成本。降低浓度会导致反应速度下降，但可提高反应的特异