酶的微生物生产工艺.pptVIP

27 微生物酶制剂生产工艺 27.1 酶生产概论 一、酶的定义和分类 二、酶的特性 三、酶的来源 四、酶的生产菌种 五、产酶菌株的制备和优化 27.1.1 酶的定义和分类 酶的定义----酶是生物体内具有特殊催化功能的蛋白质。 酶的分类----分为6大类1、氧化-还原酶2、转移酶3、水解酶4、裂合酶5、异构酶6、连接酶（合成酶） 27.1.2微生物酶工业的发展概况 早期应用：制曲酿酒 1894年，用米曲生产淀粉酶作为消化药 二次世界大战后，深层培养技术成功，酶工业快速发展： 1949年 深层发酵生产 淀粉酶 日本 二十世纪50年代，糖化酶用于葡萄糖生产， 60年代，碱性蛋白酶应用于加酶洗衣粉 70年代后，酶固定化技术发展，固定酰化酶用于氨基酸拆分，固定葡萄糖异构酶用于高果糖浆生产， 近年来有开发了青霉素酰化酶、异淀粉酶、天冬酰胺酶 目前，自然界发现的酶有2500多种，结晶分离的有数百种，有工业应用价值的60多种，已经大量生产的只有20多种。 27.1.3酶制剂的应用 1、有机合成和制药工业：酶反应与常规的化学合成结合，如 延胡索酸+氨→L-天冬氨酸 减少步骤，降低成本，无公害，收率高，副产物少。 2、医药：消化酶类 溶血栓酶类 3、化学分析和临床检验 酶法分析：微量、灵敏、精确高效 27.1.4酶制剂的生产 酶的来源 1、酶作为生物催化剂普遍存在于动物、植物、微生物中，可以直接从生物体中分离提纯而获得，早期酶的生产多是以动植物为主要原料提取而得。 2、人工合成酶的方法，目前还受到试剂、设备条件的限制。 3、利用动物、植物细胞和组织培养方法来生产酶，由于周期较长、成本较高，也存在一定难度。 4、利用微生物生产酶制剂。 发酵法生产酶的方式 1、固体培养法 固体培养法亦称麸曲培养法 ，该法是利用麸皮或米糠为主要原料，另外视需要添加其它谷糠、豆饼等，加水拌成含水适度的半固态物料作为培养基 。一般适用于霉菌的生产。 2、深层液体培养法 液体培养法是利用液体培养进行微生物的生长繁殖和产酶。根据通气（供氧）方法的不同，又分为液体表面培养和液体深层培养两种。是目前常用的方法。但无菌要求高。 27.2酶合成的代谢调节及育种 （一）基因调控理论  Jacob and Monod的操纵子学说（operon theory） 　 调节基因(regulator gene)： 可产生一种组成型调节蛋白(regulatory protein) （一种变构蛋白），通过与效应物(effector) （包括诱导物和辅阻遏物）的特异结合而发生变构作用，从而改变它与操纵基因的结合力。 调节基因常位于调控区的上游。 2.末端产物阻遏 由某代谢途径末端产物的过量累积引起的阻遏。 酶合成阻遏的现象： 实验： （1）大肠杆菌生长在无机盐和葡萄糖的培养基上时， 检测到细胞内有色氨酸合成酶的存在； （2）在上述培养基中加入色氨酸，检测发现细胞内色氨酸合成酶的活性降低，直至消失。 （3）表明色氨酸的存在阻止了色氨酸合成酶的合成，体现了菌体生长的经济原则:不需要就不合成。 色氨酸操纵子——酶的阻遏 酶的诱导和阻遏操纵子模型 3.分解代谢物阻遏 指细胞内同时有两种分解底物（碳源或氮源）存在时，利用快的那种分解底物会阻遏利用慢的底物的有关酶合成的现象。 分解代谢物的阻遏作用，并非由于快速利用的甲碳源本身直接作用的结果，而是通过甲碳源（或氮源等）在其分解过程中所产生的中间代谢物所引起的阻遏作用。 分解代谢物阻遏现象： 实验：细菌在含有葡萄糖和乳糖的培养基上生长，优先利用葡萄糖。待葡萄糖耗尽后才开始利用乳糖，产生了两个对数生长期中间隔开一个生长延滞期的“二次生长现象”(diauxie或biphasic growth）。 分解代谢物阻遏 27.2.3目前常用的产酶微生物 大肠杆菌---用来生产谷氨酸脱羧酶、天门冬氨酸酶、青霉素酰化酶、β-半乳糖苷酶。 曲霉（黑曲霉、黄曲霉）---用来生产糖化酶、蛋白酶、淀粉酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶、氨基酰化酶、脂肪酶。 枯草杆菌---用于生产a-淀粉酶、β-葡萄糖氧化酶、碱性磷酸酯酶。 啤酒酵母---用来生产转化酶、丙酮酸脱羧酶、乙醇脱氢酶。 青霉菌---用于生产葡萄糖氧化酶、青霉素酰化酶、5`-磷酸二酯酶、脂肪酶。 木霉菌---用于生产纤维素酶。 根霉菌---用于生产淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶。 链霉菌---用来生产葡萄糖异构酶。 27.3产酶菌株的制备和优化 1、产酶菌株的培养条件 2、菌种的分离筛选 3、菌种的变异诱导技术