生化实验--质粒DNA提取教案分析.pptVIP

SDS：是一种离子型表面活性剂，其主要功能是溶解细胞膜上的脂质和蛋白质，因而溶解膜蛋白，破坏细胞膜；解聚细胞中的核蛋白；SDS能与蛋白质结合，使蛋白质变性而沉淀下来，为后续处理需要。 注意： 1、处理时间不能过长；否则碱性条件下基因组DNA会慢慢断裂 2、温柔混合；避免机械剪切导致已经变性的基因组DNA断裂 SDS:十二烷基硫酸钠 溶液3：是大部分蛋白质和细菌基因组DNA沉淀 溶液3（PH=4.8）：0.5M 60ml KAC 11.5ml冰醋酸 28.5ml 水 本质上是KAC-HAC的缓冲液；用PH=4.8的溶液3是为了把强碱性的提取液调回至PH中性，使变性的质粒DNA能够复性并稳定存在 KAC：SDS能与蛋白质结合，SDS能与KAC生产PDS，PDS的溶解度要比SDS低得多，从而使大部分的蛋白质与细菌基因组DNA一起沉淀，使沉淀更完全。另外可以中和核酸上的电荷，减小相斥力，有利于变性的大分子染色体DNA、RNA互相聚合而沉淀下来。 为何加入溶液3之后出现大量的沉淀？这沉淀的本质是什么？ 这里还需把SDS除掉的原因是？ 酚/氯仿/（异丙醇）：抽提去除蛋白 酚：使蛋白质变性 氯仿：水饱和酚比重略比水重，遇到高浓度盐，离心后酚想转移至上层，不利于含质粒水相的回收，加入氯仿可增重其比重，使酚-氯仿始终在下层，另外避免酚进入水相。 异丙醇：让离心后上下层的界面更