第5章核酸概论.ppt

第 五 章 核 酸 核酸的发现： 1869年，瑞士青年科学家 F.Miescher 核酸的种类 核酸分为两大类. 脱氧核糖核酸（DNA） Deoxyribonucleic Acid 核糖核酸（RNA） Ribonucleic Acid。 核糖核酸（ribonucleic acid-RNA）:转移RNA(transfer RNA-tRNA) 、信使RNA(messenger RNA-mRNA)、核糖体RNA（ribosomal RNA-rRNA） 功能 ：三者共同参与遗传信息的表达。 第一节 核苷酸的结构 核酸的元素组成 基本元素：C H O N P 核酸的元素组成有两个特点： 1. 一般不含S。 2. P含量较多，并且恒定（9%-10%）。 因此，实验室中用定磷法进行核酸的定量分析。（DNA9.9% 、RNA9.5%） 核酸的分子组成 核酸（DNA和RNA）是一种线性多聚核苷酸，基本结构单元是核苷酸。核苷酸由核苷和磷酸组成,核苷由戊糖和碱基形成. 所以 核酸 （2）戊糖 组成核酸的戊糖有两种。DNA所含的糖为β-D-2-脱氧核糖；RNA所含的糖则为β-D-核糖。 （3）核苷 nucleoside 糖与碱基之间的C-N糖苷键，称为N-糖苷键。 嘌呤碱： C1’-N9 嘧啶碱： C1’-N1 （4） 核苷酸 DNA或RNA的差别体现在核苷酸的碱基上，所以多聚核苷酸链结构也可表示为： 在讨论有关核酸问题时，一般只关心其中碱基的种类和顺序，所以上式可以进一步简化为： 5′PAPCPGPCPTPGPTPA 3′ 或 5′ ACGCTGTA 3′ ACGCTGTA 注意多聚核苷酸链的方向性（146）。 第二节、DNA的结构 一、DNA的碱基组成（Chargaff定则）： 二、DNA的二级结构 1953年，J. Watson和F. Crick 在前人研究工作的基础上，根据⑴92％的DNA钠盐纤维晶体的X-衍射图谱，⑵DNA的碱基组成 提出了著名的DNA双螺旋结构模型（B型），并对模型的生物学意义作出了科学的解释和预测。 一）DNA双螺旋结构的要点 （1）主链：DNA分子由两条反向平行的多聚脱氧核糖核苷酸链(简称DNA单链) 沿着同一根轴平行盘绕，形成右手双螺旋结构。螺旋中的两条链方向相反，即其中一条链的方向为5′→3′，而另一条链的方向为3′→5′。 DNA双螺旋结构的要点 （2）基团的空间位置。嘌呤和嘧啶碱位于螺旋的内侧，磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧。碱基环平面与螺旋轴垂直，糖基环平面与纵轴平行。 DNA双螺旋结构的要点 （3）螺旋参数：螺旋横截面的直径约为2 nm，每条链相邻两个碱基平面之间的距离为0.34 nm，每10个核苷酸形成一个螺旋，其螺矩（即螺旋旋转一圈）高度为3.4 nm。 DNA双螺旋结构的要点 （4）碱基互补:A和T以两对氢键互补配对，G与C之间以三个氢键互补配对。 在DNA分子中，嘌呤碱基的总数与嘧啶碱基的总数相等。 （5）螺旋表面： 配对碱基并不充满双螺旋的全部空间。螺旋表面有凹下去的两个槽，一个较深，一个较浅，分别称为大沟和小沟。 二）DNA双螺旋的稳定性 DNA双螺旋结构在生理条件下是很稳定的。 维持这种稳定性的因素包括： （1）氢键； （2）碱基堆积力-螺旋稳定的主要作用力； （3）盐键； 改变介质条件和环境温度，将影响双螺旋的稳定性。 四）DNA的高级结构：超螺旋 DNA的长条核苷酸序列为一级结构，双螺旋为二级结构，双股DNA分子可能会卷绕成超卷曲(supercoiling)三级结构；这些分级都是为了说明方便，但超卷曲结构的确可以帮助大量的DNA挤进小小的细胞核中，而且使得DNA的立体构造有所变化。 超螺旋即DNA双螺旋的螺旋。 超螺旋按方向分为正超螺旋和负超螺旋两种。 正超螺旋:B-DNA螺旋加剧 负超螺旋：B-DNA螺旋减弱，利于基因表达。 所有的DNA超螺旋都是由DNA拓扑异构酶产生的。 第三节 限制性内切酶156 一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA内切酶。 该酶能识别特定外来的核酸序列而将切断；而又能对自身DNA进行修饰保护，构成自我保护的限制－修饰体系。 修饰保护：对自身DNA的酶作用位点进行修饰保护（主要甲基化）。 按限制酶的组成、与修饰酶活性关系，切断核酸的情况不同，限制性核酸内切酶分为三类，在重组DNA技术提到酶主要指Ⅱ类酶而言。 绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4至6个核苷酸的回文