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蛋白质组学 proteomics 指应用各种技术手段来研究蛋白质组的一门新兴科学，其目的是从整体的角度分析细胞内动态变化的蛋白质组成成份、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系，揭示蛋白质功能与细胞生命活动规律。 2-DE原理 （二）蛋白质相互作用研究技术 1989年Field 和Song等人在酵母细胞中设计的分析蛋白质相互作用的方法。 以真核细胞转录激活因子的结构和活性特点为基础。 3. 免疫共沉淀耦联质谱技术 原理：以细胞内源性靶蛋白为诱饵，用抗靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行免疫共沉淀（immuno-precipitation，IP）纯化靶蛋白免疫复合物，凝胶电泳分离后，质谱鉴定靶蛋白的结合蛋白。 基本原理：将高度密集排列的蛋白分子作为探针点阵固定在固相支持物上，当与待测蛋白样品反应时，可捕获样品中的靶蛋白，再经检测系统对靶蛋白进行定性和定量分析。 4.荧光共振能量转换（fluorescence resonance energy transfer ,FRET）效应分析 5.激光共聚焦 （三）蛋白质芯片技术（protein chips，protein array） * * * * * * 蛋白质组学及其研究技术 蛋白质组实验室流程 The 1st D: Isoelectric Focusing IEF + – pH 3 pH 7.5 pH 10 + – pH 3 pH 7.5 pH 10 + – pH 3 pH 7.5 pH 10 + – pH 3 pH 7.5 pH 10 水化上样 The 2nd D: SDS+ – pH 3 pH 7.5 pH10 – pH 3 pH 7.5 pH10 charge size EttanTM Dalt II Gel on Film Support 100 μg E. coli IPGphor pH 4-7 24 cm ETTAN Dalt II 12.5 % T Novel buffer 二维电泳的重复性？ 胶内差异显示技术 （DIGE） A B E. Coli grown at 30o C E. Coli grown at 42o C （三）二维电泳图象分析技术 如何从“满天星斗”中找出特别的星座？ Tandem MS Proteome 2DE pI, MW Digestion MS MS PeptIdent AA Sequence Frac, Pur SDSDigestion 2D LC CE Sequencer Decomp AACompIdent TagIdent Frac, Pur John Yates Blotting 酵母双杂交 噬菌体显示系统筛选 各种亲和分析（标签蛋白沉淀、免疫共沉淀等） 荧光共振能量转换效应分析 激光共聚焦 1．酵母双杂交系统 （yeast two-hybrid system） 酵母双杂交技术的基本原理 转录激活因子GAL4BD：N端与酵母GAL1基因启动子上游激活序列 UASG 结合的结构域 AD：C端转录激活结构域 2．噬菌体表面显示技术 phage display 标签融合蛋白沉淀实验流程示意图 *
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